油红O染色液(培养细胞专用)的应用

背景^[1-3]

油红O染色液(培养细胞专用)简称ORO染色液，可显示最小的脂滴，可优先为脂类从溶剂中吸附染料。标本不采用含有乙醇的固定液，如需要固定可采用10%福尔马林)。脂肪阳性染色结果呈橘黄至红色，但具体颜色因脂质浓度而定。

细胞油红O染色图

脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称，其共同的物理特性是不溶于水，易溶于有机溶剂(如乙醇、乙醚等)。

人体的脂肪主要有两种：1、储存脂肪，如中性脂肪，主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。

2、结构脂肪，如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等)，主要分布于细胞内。中性脂肪(Neutral fat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类，呈中性。中性脂肪是储存能量的方式之一，在氧化时释放出能量。

中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B、油红O法等。传统方法采用苏丹染料，最近发现偶氮染料油红O更适合脂肪的染色。

油红O是很强的脂溶剂和染脂剂，较易不甘油三脂结合呈小脂滴状，不磷脂结合力稍差，其染色原理一般认为是物理上的溶液作用或吸附作用，借溶液作用使脂肪染色。

染料在细胞内脂质的溶解度较原溶剂中的溶解度更大，所以在染色时染料就从有机溶剂转移入脂质而使脂肪染色。

应用^[4][5]

用于抗精神病药物对3T3-L1前脂肪细胞分化及脂联素蛋白表达水平的影响

研究氟哌啶醇、氯氮平、奥氮平、喹硫平、利培酮、齐拉西酮6种抗精神病药物对3T3-L1前脂肪细胞诱导分化及成熟脂肪细胞中脂联素表达水平的影响。

方法1.应用标准流程对3T3-L1前脂肪细胞进行复苏、培养、传代,并采用传统的激素鸡尾酒方法诱导其分化成为成熟脂肪细胞,应用油红O对诱导分化成熟的脂肪细胞进行染色,鉴定其分化程度。

2. 将不同浓度的氟哌啶醇、氯氮平、奥氮平、喹硫平、利培酮、齐拉西酮（均采用0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L、四种浓度、并设置空白对照及溶媒（DMSO）对照组）加入诱导分化液中对3T3-L1前脂肪细胞进行干预,诱导分化至第8天,用油红O染色后显微镜下观察并拍照记录。

3. 应用不同浓度的氟哌啶醇、氯氮平、奥氮平、喹硫平、利培酮、齐拉西酮（均采用0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L、四种浓度、并设置空白对照及溶媒（DMSO）对照组）对分化成熟的脂肪细胞分别干预24小时及48小时,利用Western-blot检测脂联素蛋白表达水平。

结果1.通过传统激素鸡尾酒方法成功诱导了3T3-L1前脂肪细胞分化成熟。

2.油红O染色发现：较低浓度氟哌啶醇、氯氮平、奥氮平、喹硫平、齐拉西酮干预的细胞成脂率显著高于溶媒对照组（P<0.05）,但随着抗精神病药物浓度升高,细胞中脂滴数量减少；较高浓度的各种药物的细胞成脂率则显著低于溶媒对照组,且随浓度升高脂滴数量减少。而各浓度利培酮干预的细胞成脂率均显著低于溶媒对照组（P<0.05）。

参考文献

[1]From excess adiposity to insulin resistance:The role of free fatty acids[J].Cristiano Capurso,Antonio Capurso.Vascular Pharmacology.2012(2-4)

[2]The HSP co-inducer BGP-15 can prevent the metabolic side effects of the atypical antipsychotics[J].Cell Stress and Chaperones.2012(4)

[3]Clozapine impairs insulin action by up‐regulating akt phosphorylation and Ped/Pea‐15 protein abundance[J].FabioPanariello,GiuseppePerruolo,AngelaCassese,FerdinandoGiacco,GinevraBotta,Alessia P.M.Barbagallo,GiovanniMuscettola,FrancescoBeguinot,PietroFormisano,Andreade Bartolomeis.J.Cell.Physiol..2012(4)

[4]Body Mass Index Increase,Serum Leptin,Adiponectin,Neuropeptide Y and Lipid Levels during Treatment with Olanzapine and Haloperidol[J].N.R.B.Raposo,A.S.Ferreira,W.F.Gattaz.Pharmacopsychiatry.2011(05)

[5]徐保彦.抗精神病药物对3T3-L1前脂肪细胞分化及脂联素蛋白表达水平的影响[D].中南大学,2013.