K-562人慢性髓原白血病细胞的应用

背景^[1-3]

K-562人慢性髓原白血病细胞是由Lozzio从一位临终的53岁女性慢性骨髓性白血病患者的胸水中建立。K-562细胞被归入高度未分化的粒性白细胞类，Erson等对其表面膜性质的研究表明，K-562细胞是一株人类红白血病细胞。

K-562人慢性髓原白血病细胞

K-562细胞在自然杀伤分析中广泛作为高敏感的体外受体，See Pross等将K-562细胞用于NK细胞的体外详细检测，包括NK细胞活性的数学量化。K-562母细胞是多能性造血恶性细胞，它能自发分化成可识别的红血球祖细胞、粒性白细胞、单核细胞等。

细胞复苏

1.把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

2.把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。

3.把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。

4.标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。

5.3天换一次培养基。

应用^[4][5]

用于异牛肝菌素对人慢性髓系白血病K562细胞增殖抑制的分子机制研究

对人白血病K562细胞系研究发现,iso-suillin对K562细胞的抑制作用可以通过线粒体途径和死亡受体途径诱导细胞凋亡实现。通过揭示iso-suillin诱导K562细胞增殖抑制的分子机制,寻找对白血病细胞杀伤的关键靶点,为白血病的治疗提供理论基础及可能的药物。

方法:1 K562细胞培养K562细胞以DMEM培养基,含10%FBS、1%青链霉素混合液（100×）,置于37℃5%CO2的饱和湿度培养箱中培养。

2基因芯片技术检测iso-suillin对K562细胞全基因体转录谱的影响及生物信息学分析常规培养K562细胞,用终浓度为5.48μM的iso-suillin作用24 h,提取总RNA后进行RNA品质检测,RNA信号放大与荧光标定后,Phalanx One Array TM杂交,影像扫描与数据撷取,对芯片数据进行筛选和校正,计算对照组（C）和加药组（T）荧光讯号的比值,根据log2（ratio）和p-value筛选差异表达基因,差异基因的筛选条件设定为log2|ratio|≥1且p-value<0.05;

筛选出对照组和iso-suillin处理组差异表达基因后,差异基因分别进行GO term功能富集分析（包括所处的细胞组分CC、分子功能MF和参与的生物过程BP）和KEGG信号通路富集分析。根据挑选出的差异基因,计算这些差异基因同GO分类中某或几个特定的分支的超几何分布关系,GO分析会对每个有差异基因存在的GO返回一个P值,小的P值表示差异基因在该GO中出现了富集;

根据挑选出的差异基因,计算这些差异基因同KEGG pathway的超几何分布关系,pathway分析会对每个有差异基因存在的pathway返回一个P值,小的P值表示差异基因在该pathway中出现了富集。

参考文献

[1]Gallic acid reduces cell growth by induction of apoptosis and reduction of IL-8 in HepG2 cells[J].Kelly Goulart Lima,Gabriele Catyana Krause,Aline Daniele Schuster,Anderson Velasque Catarina,Bruno Souza Basso,Fernanda Cristina De Mesquita,Leonardo Pedrazza,Elisa Simon Marczak,Bianca Andrade Martha,Fernanda Bordignon Nunes,Eduardo Cremonese Filippi Chiela,Natália Jaeger,Marcos Paulo Thomé,Gabriela Viegas Haute,Henrique Bregolin Dias,Márcio Vinícius Fagundes Donadio,Jarbas Rodrigues De Oliveira.Biomedicine&Pharmacotherapy.2016

[2]Iso-suillin from Suillus flavus Induces Apoptosis in Human Small Cell Lung Cancer H446 Cell Line[J].Jun-Xia Zhao,Qing-Shuang Zhang,Ying Chen,Sheng-Jie Yao,Yong-Xin Yan,Ying Wang,Jin-Xiu Zhang,Li-An Wang.Chinese Medical Journal.2016(10)

[3]Potential mechanism of mycelium polysaccharide from Pholiota dinghuensis Bi in regulating the proliferation and apoptosis of human breast cancer MCF-7 cells through p38/MAPK pathway[J].Dan Gan,Xiaoxiong Zeng,Rui Hai Liu,Hong Ye.Journal of Functional Foods.2015

[4]Iso-suillin from the mushroom Suillus flavus induces cell cycle arrest and apoptosis in K562 cell line[J].Ying Wang,Qingshuang Zhang,Junxia Zhao,Xiaojing Zhao,Jinxiu Zhang,Li-an Wang.Food and Chemical Toxicology.2014

[5]耿亚松.异牛肝菌素对人慢性髓系白血病K562细胞增殖抑制的分子机制研究[D].河北医科大学,2017.