人谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)ELISA KIT是利用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）含量。

实验原理

用纯化的GSH-Px抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的GSH-Px抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物（TMB）显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的GSH-Px呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（值），计算样品浓度。

人谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)结构图

操作步骤

1、取出试剂盒，于室温(20-25)放置15-30分钟。实验过程应在室温(20-25)内进行。

2、取出酶标板，按照标准品的次序分别加入50μl的标准品溶液于空白微孔中。

3、空白微孔中加入50μl的样品，空白对照加入50μl的蒸馏水；

4、在样品孔中加入10μl的生物素；(不含空白对照孔,切忌：生物素只加样品孔！)

5、在各孔中加入100μl的酶标记溶液；(不含空白对照孔)

6、将酶标板用封口胶密封后，37孵育反应1小时；(在孵育箱中保持稳定的温度与湿度)

7、充分清洗酶标板3-5次，保持各孔有充足的水压；(浓缩洗涤液以1：100的比例与蒸馏水稀释)

8、酶标板洗涤后用吸水纸彻底拍干；

9、各孔加入显色剂A、B液各50μl；(不含空白对照孔)

10、各孔加入50μl终止液，终止反应；10、20-25下避光反应15分钟；

应用^[4][5]

用于过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、脂质过氧化水平与OSAHS及OSAHS合并高血压的相关性研究

通过检测阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome,OSAHS）及阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征合并高血压（obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome associated hypertension,OSAHS+HT）患者血清过氧化氢酶（catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-PX）、脂质过氧化（lipid peroxidation,LPO）水平的变化,以丙二醛（malonaldehyde,MDA）的浓度代表脂质过氧化水平,研究三者与OSAHS及OSAHS+HT的相关性。

方法:随机选择OSAHS患者45例（均为男性）,均经多导睡眠图（polysomnography,PSG）监测确诊,其中单纯OSAHS患者24例,年龄34～57（45.16±7.05）岁,体重指数22.72～34.29（28.36±2.82）kg/m2。OSAHS+HT患者21例,年龄29～63（49.95±9.08）岁,体重指数22.6～34.29（28.76±3.55）kg/m2,高血压发生晚于OSAHS,且排除肾源性、内分泌性等因素引起的继发性高血压;

对照组23例（均为男性）,年龄29～64（47.00±10.98）岁,体重指数21.89～33.46（27.15±2.67）kg/m2,经询问病史及行Stardust便携式睡眠监测仪初筛检查,排除OSAHS。

三组间年龄和体重指数无显著性差异（均p>0.05）,并除外吸烟、饮酒、饮食及药物等干扰因素。所有入选对象均除外各种急慢性感染、肝肾疾病、风湿免疫疾病、脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病、冠心病等。

所有入选者在睡眠呼吸监测结束,晨醒5分钟内抽取空腹肘静脉血4ml,采用可见光分度法测定过氧化氢酶,比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶,硫代巴比妥酸（TBA）法测定丙二醛。并记录有关的监测指标,包括睡眠呼吸暂停低通气指数（apnea hypopnea index,AHI）、血氧饱和度（SaO2）<90%时间占总睡眠时间百分比、睡眠呼吸障碍事件总时间占总睡眠时间百分比、睡眠呼吸障碍事件时最低SaO2及平均最低SaO2、睡眠呼吸障碍最长时间。

比较正常对照组、OSAHS、OSAHS+HT三组间CAT、MDA、GSH-PX水平,三组间CAT、MDA、GSH-PX比较采用方差分析,两两比较采用SNK-q检验。OSAHS与OSAHS+HT患者的睡眠呼吸监测指标比较采用t检验,并将OSAHS、OSAHS+HT患者血清CAT、MDA、GSH-PX水平与睡眠呼吸监测指标进行直线相关分析。

参考文献

[1]Genetic aspects of the obstructive sleep apnoea-hypopnoea syndrome[J].Renata L.Riha.Somnologie-Schlafforschung und Schlafmedizin.2006(3)

[2]Evaluation of oxidative stress measurements in obstructive sleep apnea syndrome[J].W.Jordan,S.Cohrs,D.Degner,A.Meier,A.Rodenbeck,G.Mayer,J.Pilz,E.Rüther,J.Kornhuber,S.Bleich.Journal of Neural Transmission.2006(2)

[3]Reactive Oxygen Species,Vascular Oxidative Stress,and Redox Signaling in Hypertension:What Is the Clinical Significance?[J].Rhian M.Touyz.Hypertension.2004(3)

[4]Differential Calcium Regulation by Hydrogen Peroxide and Superoxide in Vascular Smooth Muscle Cells from Spontaneously Hypertensive Rats[J].Fatiha Tabet,Carmine Savoia,Ernesto L.Schiffrin,Rhian M.Touyz.Journal of Cardiovascular Pharmacology.2004(2)

[5]张晓宁.过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、脂质过氧化水平与OSAHS及OSAHS合并高血压的相关性研究[D].河北医科大学,2009.