大鼠二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠二胺氧化酶(DAO)水平。

用纯化的大鼠二胺氧化酶(DAO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入大鼠二胺氧化酶(DAO)，再与HRP标记的二胺氧化酶(DAO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的二胺氧化酶(DAO)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠二胺氧化酶(DAO)浓度。

大鼠二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于瓜氨酸对脓毒症大鼠回肠黏膜组织学及血清二胺氧化酶、D-乳酸表达水平的影响研究

探究瓜氨酸对脓毒症大鼠回肠黏膜组织学及血清二胺氧化酶、D-乳酸表达水平的影响。

方法通过制作盲肠结扎穿孔（CLP）脓毒症大鼠模型。将SD大鼠按随机分为正常组、瓜氨酸灌胃组、假手术组、单纯CLP手术组、瓜氨酸灌胃+CLP手术组。

正常组常规饲养,不做任何特殊处理;瓜氨酸灌胃组以每天每只200mg/kg^*d的剂量灌胃连续10天给药瓜氨酸溶液,假手术组大鼠行假手术,在腹腔注射水合氯醛麻醉下打开腹腔,轻轻翻动盲肠附近肠管后缝合切口,不做盲肠结扎穿孔术;单纯CLP手术组大鼠进行盲肠结扎穿孔术;

瓜氨酸灌胃+CLP手术组大鼠在盲肠结扎穿孔术前以每天每只200mg/kg^*d的剂量连续10天灌胃给药瓜氨酸溶液。

造模后开始计时,单纯CLP造模组与瓜氨酸灌胃+CLP手术组大鼠在造模后6h、12h、24h、48h分别取样,而正常对照组、瓜氨酸灌胃组、假手术组大鼠均在造模组造模后24h统一取样处死,取样前均观察大鼠外观、活跃度、饮食状况等一般状况及腹腔内病变情况,腹主动脉采血法收集大鼠的动脉血并在室温下分离血清,ELISA试剂盒分别检测血清中TNF-α、二胺氧化酶（DAO）、D-乳酸的表达水平。

在距回盲部10cm左右处取一段长约2cm的回肠组织,予以甲醛固定、石蜡包埋后行HE染色,病理显微镜下观察回肠组织黏膜病理学改变情况并行回肠黏膜损伤病理程度评分。采用SPSS20.0统计软件包进行统计数据分析,以双侧P<0.05为差异有统计学意义。

参考文献

[1]Protective Effect of Citrulline on the Hearts of Rats with Sepsis Induced by Cecal Ligation and Puncture[J].Ji-qiu Zhou,Xiong Xu,Wei-wei Zhen,Yu-long Luo,Bin Cai,Sen Zhang,Fran?ois Berthiaume.BioMed Research International.2018

[2]Modeling metabolism of the human gut microbiome[J].Stefanía Magnúsdóttir,Ines Thiele.Current Opinion in Biotechnology.2018

[3]Faecal microbiota transplantation versus placebo for moderate-to-severe irritable bowel syndrome:a double-blind,randomised,placebo-controlled,parallel-group,single-centre trial[J].Peter Holger Johnsen,Frank Hilpüsch,Jorunn Pauline Cavanagh,Ingrid Sande Leikanger,Caroline Kolstad,Per Christian Valle,Rasmus Goll.The Lancet Gastroenterology&Hepatology.2018(1)

[4]Activation of IGF-1/IGFBP-3 signaling by berberine improves intestinal mucosal barrier of rats with acute endotoxemia[J].Yan He,Xiaoming Yuan,Guangrong Zhou,Aiwen Feng.Fitoterapia.2018

[5]许雄.瓜氨酸对脓毒症大鼠回肠黏膜组织学及血清二胺氧化酶、D-乳酸表达水平的影响[D].广西医科大学,2019.