DAUDI人淋巴瘤细胞的应用

背景^[1-3]

DAUDI人淋巴瘤细胞是由E·Klein和G·Klein于1967年5月从一位16岁黑人男性Burkitt's淋巴瘤患者建立的。Daudi细胞表面免疫球蛋白阳性(sIg+)、Β2-微球蛋白阴性，EBNA阳性，并有衣壳抗原VCA；Daudi细胞携带EB病毒。Daudi细胞是典型的B淋巴母细胞，广泛应用于白血病发生机理的研究。

人淋巴瘤细胞

操作流程

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中，加入约6ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

用于人淋巴瘤细胞系Jeko-1特异性结合多肽的筛选及初步研究

以人淋巴瘤细胞系Jeko-1为筛选靶标,将噬菌体展示文库与靶细胞直接孵育反应,经过四轮淘选后,随机挑取噬菌体克隆进行测序分析,最终筛选到多肽TUZG12。进一步研究结果表明,多肽TUZG12能特异性结合淋巴瘤细胞系Jeko-1,同时对其他三种淋巴瘤细胞系P815、Raji、Su-4具有一定的结合能力,但与另外两种淋巴瘤细胞系Romas和Granta-519及人正常淋巴细胞无结合活性,证明多肽TUZG12与靶细胞具有较好的特异性和选择性。

进而将多肽TUZG12与促凋亡肽D（KLAKLAK）2偶联,细胞活性实验显示该偶联肽具有抑制Jeko-1细胞增殖的能力,IC50值是随机肽偶联物的1/3,提示多肽TUZG12能作为载体介导促凋亡肽进入Jeko-1细胞并降低细胞活力。为改善多肽体内应用的稳定性,合成了多肽TUZG12的D型逆序分子,研究表明D型逆序多肽同样具有细胞结合的选择性。

最后采用免疫共沉淀技术捕获多肽TUZG12与肿瘤细胞结合的靶分子,并通过凝胶电泳分离,找到了多肽结合蛋白。综上所述,通过噬菌体展示技术淘选到淋巴瘤细胞系Jeko-1特异性结合的多肽TUZG12,有望作为淋巴瘤的靶向诊疗载体。

参考文献

[1]Clinical and pharmacological phase I evaluation of Exherin（ADH-1）,a selective anti-N-cadherin peptide in patients with N-cadherin-expressing solid tumours.Perotti A,Sessa C,Mancuso A,Noberasco C,Cresta S,Locatelli A,Carcangiu M L,Passera K,Braghetti A,Scaramuzza D,Zanaboni F,Fasolo A,Capri G,Miani M,Peters W P,Gianni L.Annals of oncology:official journal of the European Society for Medical Oncology/ESMO.2009

[2]Characterization and development of a peptide（p160）with affinity for neuroblastoma cells.Askoxylakis Vasileios,Mier Walter,Zitzmann Sabine,Ehemann Volker,Zhang Jianbing,Krmer Susanne,Beck Carmen,Schwab Manfred,Eisenhut Michael,Haberkorn Uwe.Journal of nuclear medicine:official publication,Society of Nuclear Medicine.2006

[3]Pathology of B-cell lymphomas:diagnosis and biomarker discovery.ONDREJKA S L,HSI E D.Cancer treatment and research.2015

[4]Treatment options for mantle cell lymphoma.Smolewski P,Witkowska M,Robak T.Expert Opinion on Pharmacotherapy.2015

[5]张雅菲.人淋巴瘤细胞系Jeko-1特异性结合多肽的筛选及初步研究[D].江苏大学,2018.