人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)ELISA KIT是应用固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）检测人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)水平的快速检测试剂盒。

已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中指标的浓度呈比例关系。

嗜酸性粒细胞阳离子蛋白

操作步骤：

1．   使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2．   根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3．   加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

4．   甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5．   每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6．   甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7．   每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。

8．   取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9．   在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于过敏性鼻炎脱敏治疗前后鼻阻力、EOS及ECP相关性研究

通过变应原特异性免疫治疗前后鼻阻力及鼻细胞学相关指标的变化规律了解其在评价治疗效果及调整治疗方案中的应用价值,假如AR患者症状严重程度及治疗后缓解程度与鼻阻力、EOS、ECP呈负相关,配合主观症状评分及鼻粘膜病理检查,评价其相关性。

分析比较两组间及免疫治疗前后症状体征评分,鼻阻力及鼻灌洗液嗜酸性粒细胞及嗜酸性粒细胞阳离子蛋白值有无差异,比较治疗前与治疗1年后粘膜病理变化情况及鼻内镜检查情况。

1.定量资料选择算术均数±标准差（x±s）进行描述；

2.两定量资料的比较采用t检验,计数资料的比较采用x2检验；

3.分析两变量相关性时采用简单相关或偏相关；

4.以P<0.05为差异有统计学意义；5.各指标测量值采用SPSS13.0的重复测量数据的方差分析及SAS9.2统计软件的广义估计方程proc genmod过程步加以分析。1.免疫治疗组治疗前与治疗15周后、治疗1年后鼻症状总评分比较有统计学差异（χ2=78.83,P<0.05）,鼻阻力比较有统计学差异（F=318.811,P<0.05）。

参考文献

[1] Sublingual Immunotherapy in Children: An Updated Review[J] . Chang-Hung Kuo,Wei-Li Wang,Yu-Te Chu,Min-Sheng Lee,Chih-Hsing Hung.  Pediatrics & Neonatology . 2009 (2)

[2]Role of airway epithelial cells in development of asthma and allergic rhinitis[J] . YaoLi Wang,Chunxue Bai,Ka Li,Kenneth B. Adler,Xiangdong Wang.  Respiratory Medicine . 2008 (7)

[3]Desloratadine therapy for symptoms associated with perennial allergic rhinitis[J] . Kenneth Kim,Gordon Sussman,Jacques Hébert,William Lumry,Barry Lutsky,Davis Gates.  Annals of Allergy, Asthma & Immunology . 2006 (3)

[4]Clinical trial design, nasal allergen challenge models, and considerations of relevance to pediatrics, nasal polyposis, and different classes of medication[J] . Anders Akerlund,Morgan Andersson,Jeffrey Leflein,Torben Lildholdt,Niels Mygind.  The Journal of Allergy and Clinical Immunology . 2005 (3)

[5]张家鹏. 过敏性鼻炎脱敏治疗前后鼻阻力、EOS及ECP相关性研究[D].南方医科大学,2012.