柴胡皂苷G的制备方法

背景及概述^[1]

柴胡皂苷G是由柴胡中提取得到的天然三萜类化合物。柴胡是大宗常用中药，《神农本草经》列为上品，为伞形科植物柴胡BupleurumchinenseDC或狭叶柴胡BupleurumscorzonerifoliumWilld的干燥根，味苦，微寒，归肝、胆经，是和解表里，疏肝，升阳之要药。柴胡主要有效成分为柴胡挥发油和柴胡皂苷。

制备^[1]

8.2kg窄竹叶柴胡干燥根粉碎后用10倍量加热至沸的70％乙醇(含0.5％氨水)浸泡提取2次，每次48h。合并两次提取液，减压浓缩至无醇味，加水分散后上大孔树脂柱D101，分别用10％乙醇、95％乙醇梯度洗脱，弃去10％乙醇洗脱部位，95％乙醇洗脱部位为总皂苷(400g)。

取总皂苷300g拌样上MCI柱(小孔树脂)，分别用20％甲醇、40％甲醇、60％甲醇、90％甲醇、100％甲醇梯度洗脱。90％甲醇洗脱部位(150g)拌样上硅胶色谱柱(200-300目)分离，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(25∶1～0∶1)，经TLC检测后合并相同组分得到7个流份(A，B，C，D，E，F，G)。流份D经中压ODS柱分离(50％甲醇～100％甲醇)得到4个流份(D-1，D-2，D-3，D-4)，其中流份D-2经HPLC制备分离(固定相：unitaryC-18(250mm×10mm,5μm)，流动相：45％乙腈)得到化合物2和化合物3。流份E经中压ODS分离(50％甲醇～90％甲醇)得到5个流份(E1，E2，E3，E4，E5)，其中流份E3经HPLC制备分离(固定相：unitaryC-18(250mm×10mm,5μm)，流动相：38％乙腈)得到化合物5和化合物11。60％甲醇洗脱部位(120g)再拌样上硅胶色谱柱(200-300目)分离，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(25∶1～0∶1)，经TLC检测后合并相同组分得到3个流分(I，II，III)。经TLC和HPLC检测，将流份E和流份II合并得到流份H1(51.6g)，流份G和流份III合并得到H2(30.0g)。H1经中压MDS分离(60％～90％甲醇)得到5个流份(H1-O-1～H1-O-5)。其中流份H1-O-4经HPLC制备分离(流动相：75％甲醇)得到化合物19、流份H1-O-4-1和流份H1-O-4-2，其中流份H1-O-4-2经HPLC制备分离(流动相：64％甲醇)得到化合物15a和15b。流份H1-O-2用HPLC制备分离(流动相：76％甲醇)得到化合物21。

H2经中压ODS(流动相：40％甲醇～70％甲醇)分离得到6个流份(H2-O-1～H2-O-6)。流份H2-O-5用HPLC制备分离(流动相：33％乙腈)得到化合物27。流份H2-O-4经HPLC制备分离(流动相：31％乙腈)得到化合物23，25，和流份H2-O-4-1；流份H2-O-4-1再经HPLC制备分离(流动相：70％甲醇)得到化合物22b。流份H2-O-2经中压ODS分离(流动相：50％甲醇～90％甲醇)得到6个组分(H2-O-2-1～H2-O-2-6)。其中流份H2-O-2-5经HPLC制备分离(流动相：27％乙腈)得到化合物29；流份H2-O-2-3经HPLC制备分离(流动相：25％乙腈)得到化合物32；流份H2-O-2-2经HPLC制备分离(22％乙腈)得到化合物35。

上述制备得到的编号11、15a、15b、21、22b、23、25、27、29、32、35的三萜类化合物经过糖苷酶水解，逐个脱除单糖，得到次生苷和苷元。

15a即为柴胡皂苷G，化学式C42H68O13质谱数据m/z803[M+Na]+，核磁数据：

¹H-NMR(C5D5N，600MHz)δ：5.77(1H，d，J＝5.4Hz，H-11)，5.65(1H，d，J＝5.4Hz，H-12)，5.36(1H，d，J＝7.8Hz，H-1″)，4.98(1H，d，J＝7.8Hz，H-1′)，1.45(3H，d，J＝6.0Hz，H-6′)，1.31(3H，s，H-27)，1.30(3H，s，H-25)，1.29(3H，s，H-26)，1.00(3H，s，H-30)，0.99(3H，s，H-29)，0.89(3H，s，H-24)。

¹³C-NMR(C5D5N，600MHz)δ：155.5(C-9)，145.8(C-13)，121.6(c-12)，116.5(C-11)，107.2(C-1″)，106.5(C-1′)，85.7(C-3′)，81.9(C-3)，79.3(C-3″)，78.9(C-5″)，76.3(C-2″)，72.7(C-4″)，72.3(C-4′)，72.0(C-2′)，71.5(C-5′)，69.8(C-28)，67.2(C-16)，64.6(C-23)，63.1(C-6″)，47.4(C-19)，44.2(C-8)，44.0(C-5)，43.8(C-4)，43.6(C-14)，43.1(C-18)，41.0(C-17)，39.2(C-10)，38.1(C-1)，36.7(C-15)，34.6(C-21)，33.6(C-29)，32.6(C-7)，31.5(C-20)，27.4(C-2)，26.6(C-22)，26.5(C-27)，24.5(C-30)，21.7(C-26)，21.5(C-25)，18.4(C-6)，17.7(C-6′)，14.2(C-24).

参考文献

[1][中国发明,中国发明授权]CN201610131508.4一种三萜类化合物的医药用途