人B淋巴细胞瘤细胞的应用

背景^[1-3]

人B淋巴细胞瘤细胞存在于淋巴组织中，是癌细胞的一种，可用于杂交瘤的建立。

人B淋巴细胞瘤细胞来源于一位3岁的白人Burkitt淋巴瘤患者；EBV阴性；表达IL-4受体和低亲和性IgE受体（CD23）；每个细胞表面大约有1500个IL-4的结合位点；分泌IgM（lamda L）；表达膜型和分泌型的免疫球蛋白。

人B淋巴细胞瘤细胞

B细胞淋巴瘤是B细胞发生的实体肿瘤。包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。其分型众多，经典霍奇金淋巴瘤和结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤，现在被认为是起源于B细胞的肿瘤。弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤（MALT）、小淋巴细胞淋巴瘤/慢性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤（MCL）5种B细胞非霍奇金淋巴瘤最为常见，占非霍奇金淋巴瘤的3/4。B细胞淋巴瘤的预后和治疗取决于淋巴瘤的具体类型以及分期分级。

细胞培养步骤：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

用于鼠抗人GL50单克隆抗体的制备及其生物学功能的初步研究

备鼠抗人GL50分子的单克隆抗体并对其进行相关生物学特性的鉴定；利用自主研制的GL50mAb，研究ICOS／GL50信号途径在机体体液免疫应答和肿瘤免疫中的生物学作用。

方法：（1）以天然高表达人GL50分子的B淋巴瘤Daudi细胞为免疫原免疫Balb／C小鼠；

（2）采用B淋巴细胞杂交瘤技术将免疫小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合；

（3）以人GL50-L929、VK-L929转基因细胞为目的单抗的筛选细胞，通过间接免疫荧光标记法对杂交瘤细胞株进行筛选；

（4）单抗标记生物素，通过竞争抑制实验检测单抗识别抗原位点的情况；

（5）采用常规方法制备染色体，分析杂交瘤细胞核型；

（6）采用免疫亲和层析纯化腹水型单抗；

（7）快速试纸鉴定单抗类型；

（8）采用间接免疫荧光标记法测定单克隆抗体的效价，并检测单抗在不同细胞株和细胞上的表达；

（9）Western-blotting实验检测单抗与Daudi细胞和GL50-L929转基因细胞GL50膜蛋白的结合能力；

（10）免疫组织化学检测单抗对不同组织中GL50分子的识别能力；

（11）采用3H-TdR法，利用自行制备的GL50mAb并结合GL50-L929转基因细胞，研究ICOS／GL50信号途径在活化T细胞体外增殖中的作用；

（12）采用ELISA法检测GL50-L929和自行制备的GL50mAb对活化T细胞分泌细胞因子IL-2和IL-10的影响，并检测ICOS-L929和GL50mAb对PWM介导的B细胞分泌抗体的生物学效应。

参考文献

[1]Non-Hodgkin Lymphoma:Diagnosis and Treatment[J].Stephen M.Ansell.Mayo Clinic Proceedings.2015(8)

[2]Methylation contributes to imbalance of PRDM1α/PRDM1bβexpression in diffuse large B-cell lymphoma[J].Yi-Wen Zhang,Jie Zhang,Jun Li,Jun-Feng Zhu,Yan-Li Yang,Li-Li Zhou,Zhong-Li Hu,Feng Zhang.Leukemia&Lymphoma.2015(8)

[3]An Oncogenic Role for Alternative NF-κB Signaling in DLBCL Revealed upon Deregulated BCL6 Expression[J].Baochun Zhang,Dinis Pedro Calado,Zhe Wang,Sebastian Fr?hler,Karl K?chert,Yu Qian,Sergei B.Koralov,Marc Schmidt-Supprian,Yoshiteru Sasaki,Christine Unitt,Scott Rodig,Wei Chen,Riccardo Dalla-Favera,Frederick W.Alt,Laura Pasqualucci,Klaus Rajewsky.Cell Reports.2015(5)

[4]PRDM1/BLIMP1:a tumor suppressor gene in B and T cell lymphomas[J].Michela Boi,Emanuele Zucca,Giorgio Inghirami,Francesco Bertoni.Leukemia&Lymphoma.2015(5)

[5]朱伟.鼠抗人GL50单克隆抗体的制备及其生物学功能的初步研究[D].苏州大学,2004.