人11去氢血栓烷B2(11-DH-TXB2)ELISA 试剂盒的应用

背景^[1-3]

人11去氢血栓烷B2(11-DH-TXB2)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定样品指标水平。样品包括血清血浆尿液脑脊液细胞固体组织等。

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入样品，再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品浓度呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中浓度，或者与CUTOFF值相比较，从而判定标本阴阳性。

人11去氢血栓烷B2(11-DH-TXB2)ELISA 试剂盒

操作步骤：

1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5．每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。

8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9．在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于GPIa和COX-2基因多态性与生化阿司匹林抵抗的相关性研究

缺血性脑卒中患者GPIa、COX-2基因多态性与生化阿司匹林抵抗的相关性及生化阿司匹林抵抗的影响因素。

方法:入组缺血性脑卒中患者97例,住院期间每日规律服用阿司匹林100mg。

在第7天用PL-11血小板分析仪测定患者血小板聚集率,并留取患者血清,采用ELISA法测定11-去氢-血栓烷B2水平。采用PCR-焦磷酸测序技术对GPIa基因多态性位点807C>T（rsl126643）和COX-2基因多态性位点-765G>C（rs20417）进行基因分型。

以花生四烯酸（arachidonicacid,AA）诱导的血小板聚集率≥33.3%作为判别生化阿司匹林抵抗的标准,将患者分为阿司匹林敏感（aspirin sensitivity,AS）组和阿司匹林抵抗（aspirin resistance,AR）组。收集患者的年龄、性别、高血压和糖尿病病史、空腹血糖、脂蛋白相关磷脂酶A2、C反应蛋白、总胆固醇、低密度脂蛋白、尿酸和血小板计数等一般临床资料以及患者入院的NIHSS评分、TOAST分型、OCSP分型。比较GPIa和COX-2基因的基因型、等位基因在AS和AR组间的分布,以及两组间患者的NIHSS评分、卒中分型、11-去氢-血栓烷B2水平。

结果:AR的发生率为44.3%。以血小板聚集率为自变量,11-去氢-血栓烷B2水平为因变量进行相关分析,具有统计学意义（P=0.002）,相关系数为0.304。

参考文献

[1]The PlA1/A 2 polymorphism of glycoprotein IIIa in relation to efficacy of antiplatelet drugs:a systematic review and meta‐analysis[J].Christopher N.Floyd,Albert Ferro.Br J Clin Pharmacol.2014(3)

[2]ASA failure:Does the combination ASA/clopidogrel confer better long-term vascular protection?[J].Robert C?té,Yu Zhang,Robert G.Hart,Leslie A.McClure,David C.Anderson,Robert L.Talbert,Oscar R.Benavente.Neurology.2014(5)

[3]Switching from aspirin to clopidogrel in patients with aspirin resistance after an ischemic stroke.Is it a good solution?[J].Luis Castilla-Guerra,Maria del Carmen Fernandez-Moreno,María Sierra Navas-Alcantara,Francisco Jimenez-Gonzalo.European Journal of Internal Medicine.2014

[4]The contribution of platelet glycoproteins（GPIa C807T and GPIba C-5T）and cyclooxygenase 2（COX-2G-765C）polymorphisms to platelet response in patients treated with aspirin[J].Sayer I.Al-Azzam,Karem H.Alzoubi,Omar F.Khabour,Deniz Tawalbeh,Ola Al-Azzeh.Gene.2013(2)

[5]孙晓欣.GPIa和COX-2基因多态性与生化阿司匹林抵抗的相关性研究[D].苏州大学,2016.