人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的含量。

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)水平。用纯化的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP),再与HRP标记的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA试剂盒

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)浓度。

操作方法：

1.标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。

4.温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。

5.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

6.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

7.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

8.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

应用^[4][5]

用于癫痫患儿血清及脑脊液s-100β、胶质纤维酸性蛋白的变化及意义研究

通过观察癫痫患儿临床发作后血清及脑脊液中s-100β、GFAP的变化及二者相关性，以确定癫痫发作后是否引起脑损伤、脑损伤的程度并预测预后，并探讨星形胶质细胞在癫痫发作中的作用及意义。

方法1．癫痫患儿41例，其中全面性发作9例，部分性发作20例，婴儿痉挛症12例；对照组30例，为同期住院上呼吸道感染患儿，入院后经各项检查排除中枢神经系统（CNS）病变。两组患儿性别、年龄构成比差异无意义。

2．癫痫患儿在发作后24小时内，用药后4周、12周分别采取静脉血2ml，对照组患儿在入院后次晨采取静脉血2ml，均离心后取上清液，-80℃冰箱保存待检；婴儿痉挛症患儿入院签署腰穿知情同意书后24小时做腰椎穿刺检查，抽取脑脊液2ml，-80℃冰箱保存待检。

3．采用双抗体夹心酶联免疫吸附法，遵照试剂盒说明对标本进行检测。

4．用统计学分析软件包SPSS11.0对实验数据进行统计学分析，实验数据用均数加减标准差表示（（?）±s），多样本均数间比较采用方差分析，两样本之间用t检验，两变量是否存在相关关系用等级相关分析，以α=0.05，p＜0.05作为差别有显著意义的检验水准。

参考文献

[1]Astrocytic Response in Hippocampus and Cerebral Cortex in an Experimental Epilepsy Model[J].Elena Girardi,Alberto Javier Ramos,Gabriela Vanore,Alicia Brusco.Neurochemical Research.2004(2)

[2]Immunohistochemical investigations on the course of astroglial GFAP expression following human brain injury[J].R.Hausmann,R.Rie?,A.Fieguth,P.Betz.International Journal of Legal Medicine.2000(2)

[3]Kainic acid-induced activation of nuclear factor-κB in rat hippocampus[J].Yasuji Matsuoka,Yoshihisa Kitamura,Mitsuhiro Okazaki,Kazuhiro Terai,T.Taniguchi.Experimental Brain Research.1999(2)

[4]癫痫发作后患儿血清和脑脊液中神经元特异性烯醇化酶S-100β蛋白髓鞘碱性蛋白的变化[J].李光乾,林忠东,焦颖,施旭来,叶秀云,胡鸿文.中国当代儿科杂志.2004(06)

[5]丁瑛雪.癫痫患儿血清及脑脊液s-100β、胶质纤维酸性蛋白的变化及意义[D].郑州大学,2007.