兔超敏C反应蛋白(HS-CRP)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

兔超敏C反应蛋白(HS-CRP)ELISA KIT是采用双抗体一步夹心法的酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒。原理是往预先包被兔超敏C反应蛋白（hs-CRP）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的兔超敏C反应蛋白（hs-CRP）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

兔超敏C反应蛋白(HS-CRP)结构图

操作步骤：

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于老年维持性血液透析（MHD）患者穿透素3（PTX3）与超敏C反应蛋白（hs-CRP）及营养不良的关系的研究

目前,超敏C反应蛋白（high sensitivity c-reactive protein,hs-CRP）是临床上检测微炎症状态最常用指标之一。穿透素3（pentraxin-3,PTX3）是急性反应蛋白,与机体炎症有着密切的关系。

通过检测老年MHD患者PTX3活性,进一步探讨老年MHD患者PTX3与微炎症及营养不良的关系,从而为防治老年MHD患者的营养不良和微炎症提供新的方法。

方法:1.研究对象:共纳入经MHD治疗3个月以上,尿素清除指数（effective urea clearnance time/volume,Kt/V）>1.2的患者共81例,根据年龄分为2组,其中老年组（年龄≥60岁）MHD患者61例,非老年组（年龄<60岁）MHD患者20例。原发病:慢性肾炎31例,高血压肾病24例,糖尿病肾病16例,缺血性肾病1例,多囊肾1例,病因不明8例。同期健康志愿者18例测取PTX3的医学参考值范围。

2. 收集入选者一般资料:包括年龄、性别、透析龄、原发病、近期是否有感染。

3. 监测项目及参数测定:测量血肌酐（serum creatinine,Scr）、血清白蛋白（albumin,Alb）、血红蛋白（hemoglobin,HB）等指标,采用酶联免疫吸附（ELISA）法测定PTX3,采用免疫透射比浊法测定hs-CRP,≥3mg/L为存在微炎症状态。

采用单室模型Kt/V值做为评价所有入选的MHD患者透析充分性的指标。主观综合营养评估（subjective global assessment,SGA）根据包括体重、饮食等多个方面测量:分为良好（SGA1）、轻中度营养不良（SGA2）、重度营养不良（SGA3）。

参考文献

[1]A novel long non-coding RNA CYP4B1-PS1-001 regulates proliferation and fibrosis in diabetic nephropathy[J].Min Wang,Suyu Wang,Di Yao,Qin Yan,Weiping Lu.Molecular and Cellular Endocrinology.2016

[2]Correlation between pentraxin-3 and endothelial dysfunction in obstructive sleep apnea syndrome[J].Asiye Kanbay,Elif Kaya,Hakan Büyükoglan,Mehmet Kaya,Zuhal Simsek,Nuri Tutar,Ramazan Demir.Annals of Thoracic Medicine.2015(3)

[3]Re:The Humoral Pattern Recognition Molecule PTX3 is a Key Component of Innate Immunity against Urinary Tract Infection[J].Edward M.Schaeffer.The Journal of Urology.2015(1)

[4]Effects of leptin and adiponectin on the growth of porcine myoblasts are associated with changes in p44/42 MAPK signaling[J].K.Will,J.Kuzinski,C.Kalbe,M.F.Palin,C.Rehfeldt.Domestic Animal Endocrinology.2013(4)

[5]刘洁琼.老年维持性血液透析（MHD）患者穿透素3（PTX3）与超敏C反应蛋白（hs-CRP）及营养不良的关系的研究[D].承德医学院,2019.