人载脂蛋白C3(APO C3)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人载脂蛋白C3(APO C3)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法检测样品中人载脂蛋白C3(APO C3)的水平。原理：往预先包被人载脂蛋白C3(Apo-C3)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人载脂蛋白C3(Apo-C3)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人载脂蛋白C3(APO C3)检测原理图

操作步骤：

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于动脉粥样硬化脑梗死与载脂蛋白C3、超敏C反应蛋白水平的相关性研究

探讨急性动脉粥样硬化脑梗死与血浆载脂蛋白C3（Apo-C3）及超敏C反应蛋白（high-sensitive C-reactive protein,hs-CRP）的关系。

方法：收集急性动脉粥样硬化脑梗死患者（男性38例,女性22例）为实验组,年龄43-79岁,平均年龄（58.46±7.24）岁,30例健康体检者（男性17例,女性13例）为对照组,年龄42-72岁,平均年龄（56.86+7.71）岁。记录比较两组一般情况如血糖、血压、血脂、既往史。

用酶联免疫分析法检查两组血浆Apo-C3水平,用免疫比浊法检查两组血浆hs-CR水平,比较两组Apo-C3及hs-CR浓度的差异。

结果1.实验组血浆Apo-C3水平较对照组明显升高,高甘油三酯血症、高VLDL、糖尿病患者血浆Apo-C3水平较对照组明显升高,均具有统计学差异（p<0.01）。

2. Apo-C3水平与脑梗死面积呈正相关。

3. 不稳定斑块较稳定斑块Apo-C3水平明显升高,二者有统计学差异（p<0.01）。

4. 实验组血浆hs-CRP水平在急性期明显高于对照组,二者有统计学差异（p<0.01）,随着病情的好转hs-CRP水平逐渐下降但仍高于对照组,二者有统计学差异（p<0.01）。

结论1.Apo-C3与动脉粥样硬化脑梗死有密切关系,血浆Apo-C3升高可能导致血浆甘油三酯、VLDL、血糖的升高。

2.血浆hs-CRP的下降可提示病情的好转。

参考文献

[1]Triglycerides and the risk ofcoronary heart disease:10,158 incident cases among 262,525 partici-pants in 29 Western prospective studies.Sarwar N,Danesh J,Eiriksdottir G,et al.Circulation.2007

[2]Rate of production of plasma and very-low-density lipoprotein（VLDL）apolipoprotein C-III is strongly related to the concentration and level of production of VLDL triglyceride in male subjects with different body weights and levels of insulin sensitivity.Cohn,J.S.,Patterson,B.W.,Uffelman,K.D.The Journal of Clinical Endocrinology.2004

[3]Nonfasting triglycerides and risk of myocardial infarction,ischemic heart disease,and death in men and women.Nordestgaard BG,Benn M,Schnorhr P,et al.The Journal of The American Medical Association.2007

[4]Expression ofapolipoprotein CIII in McA-RH7777 cells enhancesVLDL assembly and secretion under lipid-rich condi-tions.Sundaram M,Zhong S,Khalil MB,et al.Journal of Lipid Research.2010

[5]胡林壮.动脉粥样硬化脑梗死与载脂蛋白C3、超敏C反应蛋白水平的相关性研究[D].安徽医科大学,2011.