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鸡磷脂酰乙醇胺(PE)ELISA试剂盒的应用

发布日期:2021/3/1 10:31:51

背景[1-3]

鸡磷脂酰乙醇胺(PE)ELISA试剂盒应用固相夹心法酶联免疫吸附法可以在体外检测鸡磷脂酰乙醇胺(PE)的浓度水平。已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。

鸡磷脂酰乙醇胺(PE)ELISA示意图

鸡磷脂酰乙醇胺(PE)ELISA试剂盒操作步骤

1)使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。

2)根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。

3)加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。

4)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

5)每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

6)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

7)每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。

8)取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。

9)在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用[4][5]

用于饲粮中添加粪肠球菌对肉仔鸡生产性能、肉品质和血浆代谢组的影响研究

饲粮中添加粪肠球菌对肉仔鸡血浆代谢组的研究应用液相色谱-质谱(LC-MS)和气相色谱-质谱(GC-MS)联用的代谢组学分析技术研究饲粮中添加不同剂量粪肠球菌对肉仔鸡血浆代谢物的影响,将AA肉仔鸡的血浆样品经过处理之后,用液相色谱-质谱和气象色谱-质谱联用技术检测肉仔鸡血浆中的代谢产物,根据质谱数据库对肉仔鸡血浆中的代谢物进行鉴定。

结果表明:1)与对照组相比,添加5×108 CFU/kg粪肠球菌组中血浆代谢产物相对含量发生显著变化(P<0.05),主要为磷脂酰胆碱(PC(14:0))、溶血磷脂酰乙醇胺(LysoPE(22:5))、PC(36:6)/PE(39:6)、磷脂酰肌醇(PI(18:0))、磷脂酸(PA(22:6))、PC(26:1)/PE(29:1)、磷脂酰甘油酯(PG(18:2))、棕榈酸、甘氨酸、富马酸、L-苏氨酸、羟基丁酸、D-葡萄糖、D-半乳糖和单硬脂酸甘油酯;

添加1×108 CFU/kg粪肠球菌组中血浆代谢产物相对含量也发生显著变化(P<0.05),主要为磷脂酰乙醇胺(PE(20:5))、1-亚麻酸甘油磷酸胆碱、LysoPE(22:5)、PE(20:3)、PC(16:0)、PC(20:3)、PC(36:6)/PE(39:6)、PC(40:7)、PE(18:3)、甘油磷脂-N-花生四烯酸乙醇胺、PC(26:1)/PE(29:1)、磷酸、磷酸盐、羟基丁酸、透明质酸、D-葡萄糖、棕榈反油酸、à-D吡喃葡糖苷、棕榈酸、胆固醇、D-果糖、D-葡萄糖/D-半乳糖、9-十八碳烯酸、蜜二糖。

2) 添加5×108CFU/kg的粪肠球菌组与添加1×108CFU/kg的粪肠球菌组相比,AA肉仔鸡血浆代谢产物含量差异显著(P<0.05),发生变化的主要化合物为PC(20:5)、PC(18:0)/PE(21:0)、LysoPE(22:5)、1-亚麻酸甘油磷酸胆碱、PE(20:5)、PC(20:3)、PC(17:2)/PE(20:2)、甘氨酸、富马酸、羟基丁二酸、D-果糖和半乳糖。

结论:饲粮中添加粪肠球菌后对肉仔鸡血浆代谢组产生显著影响,35种潜在代谢物存在统计学差异,其中与肉品质有关的物质有磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、溶血磷脂酰乙醇胺(LysoPE)、PC/PE、磷酸、羟基丁二酸、D-葡萄糖和棕榈酸。

参考文献

[1]The Role of Oxidative Stress on Necrotizing Enterocolitis in Very Low Birth Weight Infants[J].Serafina Perrone,Maria Luisa Tataranno,Antonino Santacroce,Simona Negro,Giuseppe Buonocore.Current Pediatric Reviews.2014(3)

[2]Effects of microencapsulated Enterococcus fecalis CG1.0007 on growth performance,antioxidation activity,and intestinal microbiota in broiler chickens[J].W.Han,X.L.Zhang,D.W.Wang,L.Y.Li,G.L.Liu,A.K.Li,Y.X.Zhao.Journal of Animal Science.2013(9)

[3]Lactobacillus plantarum strains as potential probiotic cultures with cholesterol-lowering activity[J].Ying Huang,Xiaojun Wang,Jinfeng Wang,Fei Wu,Yujie Sui,Longfei Yang,Zonggui Wang.Journal of Dairy Science.2013(5)

[4]Stored swine manure and swine faeces as reservoirs of antibiotic resistance genes[J].T.R.Whitehead,M.A.Cotta.Lett Appl Microbiol.2013(4)

[5]胥彩玉.饲粮中添加粪肠球菌对肉仔鸡生产性能、肉品质和血浆代谢组的影响[D].甘肃农业大学,2015.

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