冠状动脉平滑肌细胞的应用

背景^[1-3]

冠状动脉平滑肌细胞来源于人的正常心脏组织，平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫荧光染色为阳性。

冠状动脉是供给心脏血液的动脉，起于主动脉根部，分左右两支，行于心脏表面。冠状动脉疾病发生和发展的一个主要因素是由于血管平滑肌细胞转变成为了具有繁殖能力的表型。近期的研究表明平滑肌细胞能表达钙离子通道，ICAM-1和VCAM-1。其中ICAM-1和VCAM-1的表达可能是造成血管壁炎症反应，并进一步造成血管疾病的原因。因此，对冠状动脉血管平滑肌细胞的体外培养和研究可用来发现和确定新的冠状血管疾病的靶向治疗方法。

平滑肌纤维呈长梭形，无横纹。平滑肌受自主神经支配，为不随意肌。该肌收缩缓慢、持久。细胞核一个，呈长椭圆形或杆状，位于中央，收缩时核可扭曲呈螺旋形，核两端的肌浆较丰富。平滑肌纤维大小不一，一般长200μm，直径8μm；小血管壁平滑肌短至20μm，而妊娠子宫平滑肌可长达500μm。平滑肌主要分布于血管、气管、胃、肠等壁内。平滑肌纤维可单独存在，绝大部分是成束或成层分布的。

应用^[4][5]

用于Neuregulin-1对冠状动脉平滑肌细胞功能的影响研究

检测Neuregulin-1因子处理对冠状动脉平滑肌细胞增殖、迁移、存活和蛋白表达的影响。

方法：选用第3-6次传代的人冠脉平滑肌细胞（HCASMC）,当培养的细胞铺满瓶底的90%左右或者长成融合单层后即可加入Neuregulin-1（NRG-1,下同）进行实验。依据不同浓度NRG-1处理正常或缺血缺氧培养条件下的HCASMC进行实验分组。

运用MTT法检测不同浓度的NRG-1对HCASMC增殖影响,Transwe1124孔板法检测不同浓度的NRG-1对HCASMC迁移影响；Hoechst 33342核染色法检测NRG-1对HCASMC凋亡率的影响；Western blot检测正常培养条件下NRG、ErbB2/3/4、磷酸化ErbB2受体、磷酸化ErbB3受体、磷酸化ErbB4受体以及缺血缺氧条件下促血管生成因子-1（Ang-1）、促血管生成因子-2（Ang-2）和血管内皮生成因子（VEGF）在HCASMC中的表达水平。

结果1、HCASMC生长特点：培养的HCASMC为贴壁细胞,形态呈成纤维样的长梭形、杆状或者蚯蚓型；缺血缺氧条件下形态比较瘦长,数量减少,生长缓慢,易成团,细胞碎片较多。

2、正常培养时,HCASMC表达ErbB2/3/4、不表达NRG；加入NRG-1处理后的HCASMC磷酸化ErbB2/3/4增加（P<0.05）,加入抑制剂后磷酸化ErbB2/3/4的表达减少（P<0.05）

参考文献

[1]Repetitive Myocardial Ischemia Promotes Coronary Growth in the Adult Mammalian Heart[J].Kory J.Lavine,Attila Kovacs,Carla Weinheimer,Douglas L.Mann.Journal of the American Heart Association.2013(5)

[2]Adipose-derived stem cells combined with Neuregulin-1 delivery systems for heart tissue engineering[J].P.Díaz-Herráez,E.Garbayo,T.Simón-Yarza,F.R.Formiga,F.Prosper,M.J.Blanco-Prieto.European Journal of Pharmaceutics and Biopharmace.2013(1)

[3]Co-delivery of Vascular Endothelial Growth Factor and Angiopoietin-1 Using Injectable Microsphere/Hydrogel Hybrid Systems for Therapeutic Angiogenesis[J].Seung-Hwa Shin,Jangwook Lee,Dong-Gyun Ahn,Kuen Yong Lee.Pharmaceutical Research.2013(8)

[4]Association between C1019T polymorphism of the connexin37 gene and coronaryheart disease in patients with in?stent restenosis[J].Su?Xia Guo,Zhen?Yu Yang,Ru?Xing Wang,Ying Yang,Hua?Ming Cao,Tao Zhang.Experimental and Therapeutic Medicine.2013(2)

[5]陈力铨.Neuregulin-1对冠状动脉平滑肌细胞功能的影响[D].广西医科大学,2015.