R 1610(仓鼠肺细胞)的应用

背景^[1-3]

R 1610(仓鼠肺细胞)是V79细胞(的一个用乙基甲基苯磺酸处理的衍生克隆。细胞的半乳糖激酶缺失，能抗2-脱氧半乳糖和8-氮杂鸟嘌呤。

R 1610(仓鼠肺细胞)实验方法步骤：

培养基及培养冻存条件准备：

1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022,添加NaHCO3 1.5g/L,D-葡萄糖2.5g/L,丙酮酸钠0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。

2、培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3、冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

细胞处理：

1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

用于DDT对中国仓鼠肺成纤维细胞（V79）遗传毒性的研究

研究DDT对中国仓鼠肺成纤维细胞V79的遗传毒性。

方法:MTT法测定细胞活性,集落形成试验检测细胞增殖,微核实验测定细胞毒性,染色体畸变分析检测细胞遗传损伤。结果:与溶剂对照组相比,MTT法结果显示,分别处理4h、8h、12h、24h时6.25μg/ml、12.50μg/ml、25.00μg/ml、50.00μg/ml DDT均可降低V79细胞的活性,与10μg/ml CP的作用类似,有统计学意义(P<0.05),并表现出良好的剂量效应关系和时间效应关系。

集落形成实验结果显示,处理4h、8h、12h、24h时12.50μg/ml、25.00μg/ml、50.00μg/ml DDT可抑制V79细胞的增殖,与10μg/ml CP的作用类似具有统计学意义(P<0.05),具有良好的剂量效应和时间效应关系。

微核实验结果表明,在无体外活化系统S9参与时,DDT各浓度组对V79细胞微核率结果无统计学意义(P>0.05),表明DDT对V79细胞无明显DNA损伤,没有表现出遗传毒性;添加S9以后,6.25μg/ml、12.50μg/ml、25.00μg/ml、50.00μg/ml DDT均对V79细胞有显著的遗传毒性,此结果有统计学意义(P<0.05),且在6.25μg/ml、50.00μg/ml剂量时呈现剂量效应关系,该关系有统计学意义(P<0.05)。

染色体畸变试验结果显示,在不添加S9时,DDT各浓度组对V79细胞染色体畸变效果无统计学意义(P>0.05),视为对细胞染色体没有造成损伤,无明显致畸作用;在有S9系统参与以后,6.25μg/ml、12.50μg/ml、25.00μg/ml、50.00μg/ml DDT均对V79细胞染色体畸变有显著影响,该影响有统计学意义(P<0.05),可造成细胞染色体损伤,且在6.25μg/ml、50.00μg/ml剂量时具有剂量效应关系。

结论:DDT具有与环磷酰胺相似的细胞毒性,能够降低V79细胞的细胞活性,抑制细胞增殖。在体外活化系统S9作用下,DDT可促使V79细胞微核率和染色体畸变发生率的增加,而无体外活化系统S9时此作用不明显。

参考文献

[1]Organochlorine Pesticides,Polychlorinated Biphenyls,and Polybrominated Diphenyl Ethers in Irrawaddy Dolphins from India[J].K.Kannan,K.Ramu,N.Kajiwara,R.K.Sinha,S.Tanabe.Archives of Environmental Contamination and Toxicology.2005(3)

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[3]Determination of polybrominated diphenyl ethers in marine biological tissues using microwave-assisted extraction[J].Stéphane Bayen,Hian Kee Lee,Jeffrey Philip Obbard.Journal of Chromatography A.2004(2)

[4]Sperm chromatin structure assay(scsa?)parameters are related to fertilization,blastocyst development,and ongoing pregnancy in in vitro fertilization and intracytoplasmic sperm injection cycles[J].Michael R Virro,Kjersten L Larson-Cook,Donald P Evenson.Fertility and Sterility.2004(5)

[5]喻琳.DDT对中国仓鼠肺成纤维细胞（V79）遗传毒性的研究[D].重庆医科大学,2010.