RS1细胞专用培养基的应用

背景^[1-3]

RS1细胞专用培养基是RS1细胞的完全培养基，包含RS1细胞生长的所有营养成分，无需添加其他成分可以直接用于RS1细胞培养。

RS1细胞（大鼠皮肤成纤维样细胞）该细胞系来源于一大鼠的皮肤组织。

RS1大鼠皮肤成纤维样细胞培养操作

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

用于ITGB4BP对创面修复中成纤维细胞的影响及其相关机制研究

一方面ITGB4BP作为真核起始因子参与调节核糖体40s和60s的结合形成80s亚基,也能参与RNA诱导沉默复合体（RNA-induced silencing complex,RISC）的形成而调控mRNA的降解;

另一方面,ITGB4BP参与调节Wnt信号通路中的β-catenin的表达,通过影响细胞骨架和粘附发挥调控细胞分化的作用。因此,一方面ITGB4BP可能通过下调促瘢痕形成相关基因和蛋白达到抑制瘢痕形成的目的;另一方面ITGB4BP也可能通过调控细胞骨架和粘附,影响细胞应力的感知而抑制肌成纤维细胞的形成。

在此基础上,进行了系统的研究,主要涉及以下三个方面:1)ITGB4BP基因和蛋白在不同来源的成纤维细胞和不同组织中的差异表达;

2) 通过体外试验:在增生性瘢痕来源的成纤维细胞中强制高表达ITGB4BP后,观察靶细胞在该基因作用下的功能变化及其可能的分子信号通路;

3) 通过在体纤维化疾病模型,观察ITGB4BP对不同组织纤维化的影响。

ITGB4BP低表达于增生性瘢痕来源的成纤维细胞首先收集了烧伤后增生性瘢痕组织和其同体对照正常皮肤组织进行原代分离、培养获得了增生性瘢痕来源的成纤维细胞和正常皮肤来源的成纤维细胞,然后利用Real-Time PCR技术和Western Blotting技术分别从mRNA水平和蛋白水平检测了增生性瘢痕来源的成纤维细胞和正常皮肤来源的成纤维细胞中ITGB4BP的表达。

结果发现ITGB4BP基因无论是mRNA水平还是蛋白水平均低表达于增生性瘢痕来源的成纤维细胞。

参考文献

[1]MMP-13 Plays a Role in Keratinocyte Migration,Angiogenesis,and Contraction in Mouse Skin Wound Healing[J].Noriko Hattori,Satsuki Mochizuki,Kazuo Kishi,Tatsuo Nakajima,Hironari Takaishi,Jeanine D’Armiento,Yasunori Okada.The American Journal of Pathology.2009(2)

[2]Pentoxifylline modifies three-dimensional collagen lattice model contraction and expression of collagen types I and III by human fibroblasts derived from post-burn hypertrophic scars and from normal skin[J].Burns.2009(5)

[3]Roles of calcitonin gene-related peptide in facilitation of wound healing and angiogenesis[J].Masaya Toda,Tatsunori Suzuki,Kanako Hosono,Yukiko Kurihara,Hiroki Kurihara,Izumi Hayashi,Hedero Kitasato,Sumio Hoka,Masataka Majima.Biomedicine&Pharmacotherapy.2008(6)

[4]Cellular and molecular pathology of HTS:basis for treatment[J].AlexisArmour,Paul G.Scott,Edward E.Tredget.Wound Repair and Regeneration.2007

[5]谭江琳.ITGB4BP对创面修复中成纤维细胞的影响及其相关机制研究[D].第三军医大学,2010.