U-251 MG(U251MG)人星形胶质瘤细胞的应用

背景^[1-3]

U-251 MG(U251MG)人星形胶质瘤细胞是来源于人星形胶质瘤组织，经永生化处理的稳定细胞系，主要用于人星形胶质瘤细胞的细胞学科研研究。

星形胶质细胞瘤（astrocytome）是最常见的胶质瘤，约占胶质细胞瘤的65%。研究表明，该肿瘤中原癌基因C-sis有过度表达，erb-B1则有扩增。C-sis的过度表达导致PDGF-β链的增加；erb-B1扩增则可使EGF受体过度表达。此外，肿瘤抑制基因P53、Rb、P16可有失活，提示这些改变可能与肿瘤性的生长有关。

U-251 MG（U251MG）人星形胶质瘤细胞培养注意事项：

1、实验进行前，无菌室及无菌操作台（laminarflow）以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。

2、U-251 MG（U251MG）人星形胶质瘤细胞操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70%ethanol擦拭后才带入无菌操作台内。

3、小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。

3、工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。

应用^[4][5]

用于Genistein抑制由HSV-1感染导致的人星形胶质瘤细胞增殖和凋亡异常研究

1建立人单纯疱疹病毒Ⅰ型（Herpes simplex virus,HSV-1）感染人星形胶质瘤细胞U251模型。研究HSV-1感染对U251细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。

2研究Genistein（GST）对HSV-1感染导致的U251细胞增殖和凋亡异常的抑制作用。

材料和方法：1以MOI（multiplicity of infection）为5的HSV-1感染U251细胞,观察细胞形态学的改变。MTT比色法检测HSV-1感染后U251细胞增殖的变化；Guava Nexin Reagent试剂盒流式细胞术检测细胞凋亡比率的变化；PI染色流式细胞仪检测细胞周期的变化。

2设立GST组、GST+HSV-1组、HSV-1组和对照组,采用形态学观察、MTT比色法检测HSV-1感染后U251细胞增殖的变化。Guava Nexin Reagent试剂盒流式细胞术和RT-PCR方法分别检测感染12h、24h和36h后GST（15μg/ml）组、GST+HSV-1（15μg/ml）组、HSV-1组和对照组U251细胞凋亡比率的变化和gDmRNA的表达情况。

结果：1对照组U251细胞胞体细长,突起延展充分,HSV-1组U251细胞在感染24 h后出现细胞融合；48 h后出现细胞病变效应。MTT法结果显示HSV-1组OD值始终低于对照组（P<0.05）。Annexin V/7-AAD双染流式细胞术显示HSV-1感染后12h,24 h,36 h U251细胞凋亡率高于相应对照组（P<0.05）。PI染色流式细胞仪结果显示,感染12 h,24h和36hS期细胞始终高于对照组（P<0.05）；Go/G1期细胞低于对照组（P<0.05）。24 h后,G2/M期细胞比率开始高于对照组（P<0.05）。

2 MTT比色法结果显示处理组之间的差别具有高度统计学意义（F=510.743,P<0.05）,并有明显的时间效应（F=2243.2,P<0.05）。15μg/ml GST+HSV-1组MTT均值高于HSV-1组均值（P<0.05）。形态学观察显示HSV-1组感染12h后出现融合,36h后出现细胞病变效应。15μg/ml GST+HSV-1组细胞感染12h后未见明显病变；24h后局部出现少量融合；36h后融合增多,但多数细胞仍为正常形态。AnnexinV/7-AAD双染流式细胞术结果显示处理组之间的差别具有高度统计学意义（F=1788.58,P<0.05）,并有时间效应（F=766.478,P<0.05）。GST+HSV-1组凋亡率均低于HSV-1组（P<0.05）。

参考文献

[1]Structure–activity relationship of flavonoids as influenza virus neuraminidase inhibitors and their in vitro anti-viral activities[J].Ai-Lin Liu,Hai-Di Wang,Simon MingYuen Lee,Yi-Tao Wang,Guan-Hua Du.Bioorganic&Medicinal Chemistry.2008(15)

[2]Health Effects of Soy Protein and Isoflavones in Humans1-3[J].Xiao,Chao Wu.The Journal of Nutrition.2008(6)

[3]The Classical Complement Cascade Mediates CNS Synapse Elimination[J].Beth Stevens,Nicola J.Allen,Luis E.Vazquez,Gareth R.Howell,Karen S.Christopherson,Navid Nouri,Kristina D.Micheva,Adrienne K.Mehalow,Andrew D.Huberman,Benjamin Stafford,Alexander Sher,Alan M.Litke,John D.Lambris,Stephen J.Smith,Simon W.M.John,Ben A.Barres.Cell.2007(6)

[4]Genistein genotoxicity:Critical considerations of in vitro exposure dose[J].Catherine B.Klein,Audrey A.King.Toxicology and Applied Pharmacology.2007(1)

[5]王倩.Genistein抑制由HSV-1感染导致的人星形胶质瘤细胞增殖和凋亡异常[D].青岛大学,2011.