沙氏葡萄糖液体培养基的应用

背景^[1-3]

沙氏葡萄糖液体培养基用于药品或生物制品中霉菌和酵母菌、白色念珠菌等真菌培养，成分(g/L)：动物组织胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物10；葡萄糖20；pH值5.6±0.2 25℃。用法：称取本品36克，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，灭菌，待冷却至60℃左右，制成平板备用。原理：葡萄糖提供碳源;动物组织胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物提供氮源。

真菌，是一种具真核的、产孢的、无叶绿体的真核生物。包含霉菌、酵母、蕈菌以及其他人类所熟知的菌菇类。目前已经发现了十二万多种真菌。真菌独立于动物、植物和其他真核生物，自成一界。真菌的细胞有含甲壳素,能通过无性繁殖和有性繁殖的方式产生孢子。菌体由菌丝组成，无根、茎、叶的分化，无叶绿素，不能自己制造养料，以寄生或腐生方式生活的低等生物。真菌菌丝呈管状，多数菌丝有隔膜，此类菌丝为多细胞，隔膜中央有小孔，使细胞质、细胞核得以通过。

有些真菌的菌丝无隔膜，为多核细胞。真菌对干燥、阳光、紫外线及一般化学消毒剂有耐受力，但充分暴露于阳光，紫外线及干燥情况下大多数真菌可被杀死，且对2.5%碘酒，10%福尔马林都敏感，一般可用福尔马林薰蒸被真菌感染的房间。对热敏感，一般60℃1小时可杀死真菌菌丝和孢子。

应用^[4][5]

用于MALDI-TOF MS在真菌鉴定中的应用研究

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术（matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS）在真菌鉴定中的应用价值。

方法关于丝状真菌鉴定应用:收集医院患者标本中分离培养出的丝状真菌63株,购买5株标准菌株,筛选出MALDI-TOF MS用于丝状真菌鉴定的培养基、培养时间、培养方式;同时进行MALDI-TOF MS鉴定、形态学鉴定,形态学不能鉴定的菌株进行内转录间隔ITS序列测定;对三种方法的结果进行对比,以评价MALDI-TOF MS在丝状真菌鉴定中的能力。

关于念珠菌鉴定应用:利用质控菌株ATCC 90028白色念珠菌确定用于MALDI-TOF MS鉴定的培养条件;然后,从我院2015年11月2016年6月MALDI-TOF MS鉴定的299株念珠菌中随机选取101株念珠菌,对上述念珠菌同时进行MALDI-TOF MS鉴定、显色培养鉴定、ATB Expression鉴定,对三种方法鉴定结果进行对比分析,以评价MALDI-TOF MS在念珠菌鉴定中的能力。

结果筛选MALDI-TOF MS用于丝状真菌鉴定的培养基为沙氏葡萄糖液体培养基,培养时间为24h。67株丝状真菌MALDI-TOF MS鉴定结果与形态学鉴定和分子生物学鉴定结果基本一致,在属、种水平的鉴定总一致率分别为98.5%、94.1%,对曲霉菌属鉴定种水平一致率达到100%。

MALDI-TOF MS对101株念珠菌进行鉴定结果与显色培养和ATB Expression鉴定结果比较,在属水平鉴定一致率为98.02%,在种水平鉴定一致率为97.03%。

参考文献

[1]MALDI‐TOF mass spectrometry identification of filamentous fungi in the clinical laboratory[J].Stéphane Ranque,Anne‐Cécile Normand,Carole Cassagne,Jean‐Benjamin Murat,Nathalie Bourgeois,Frédéric Dalle,Martine Gari‐Toussaint,Patrick Fourquet,Marijke Hendrickx,Renaud Piarroux.Mycoses.2014(3)

[2]Candida albicans and non-Candida albicans fungemia in an institutional hospital during a decade[J].Laurence Parmeland,Mathieu Gazon,Claude Guerin,Laurent Argaud,Jean-Jacques Lehot,Olivier Bastien,Bernard Allaouchiche,Mauricette Michallet,Stephane Picot,Anne-Lise Bienvenu.Medical Mycology.2013(1)

[3]Performance of the Vitek MS v2.0 System in Distinguishing Streptococcus pneumoniae from Nonpneumococcal Species of the Streptococcus mitis Group[J].John A.Branda,Rachelle P.Markham,Cherilyn D.Garner,Jenna A.Rychert,Mary Jane Ferraro.Journal of Clinical Microbiology.2013(9)

[4]MALDI-TOF MS Andromas strategy for the routine identification of bacteria,mycobacteria,yeasts,Aspergillus spp.and positive blood cultures[J].E.Bille,B.Dauphin,J.Leto,M.-E.Bougnoux,J.-L.Beretti,A.Lotz,S.Suarez,J.Meyer,O.Join-Lambert,P.Descamps,N.Grall,F.Mory,L.Dubreuil,P.Berche,X.Nassif,A.Ferroni.Clinical Microbiology and Infection.2012(11)

[5]王庆玲.MALDI-TOF MS在真菌鉴定中的应用研究[D].青岛大学,2017.