HUT 102(人T淋巴瘤细胞)的应用

背景^[1-3]

HUT 102(人T淋巴瘤细胞)是一株T细胞淋巴瘤细胞系。该细胞具有成熟T细胞系的特征，细胞表面呈现IL-2活性，E花环阳性，表面免疫球蛋白、EBV核抗原和TdT（Terminal deoxyribonucleotidyl-transferase）反应阴性。该细胞系还可释放与T细胞淋巴瘤相关的单一C型逆转病毒（retrovirus），即HTLVI病毒。

T细胞淋巴瘤约占非霍奇金淋巴瘤10%～15%，在我国比例更高。2008年世界卫生组织（WHO）将T细胞淋巴瘤分为不同的病理亚型：T细胞、NK细胞淋巴瘤/白血病。大致分为两类：前T细胞肿瘤和胸腺后T细胞淋巴瘤，可原发于淋巴结、结外组织或皮肤。与侵袭性B细胞淋巴瘤相比，成熟或外周T细胞淋巴瘤的预后较差。

淋巴细胞（lymphocyte）是白细胞的一种，是体积最小的白细胞。其由淋巴器官产生，主要存在于淋巴管中循环的淋巴液中，是机体免疫应答功能的重要细胞成分，是淋巴系统几乎全部免疫功能的主要执行者，是对抗外界感染和监控体内细胞变异的一线“士兵”。

淋巴细胞是一类具有免疫识别功能的细胞系，按其发生迁移、表面分子和功能的不同，可分为T淋巴细胞（又名T细胞）、B淋巴细胞（又名B细胞）和自然杀伤(NK)细胞。T细胞和B细胞都是抗原特异性淋巴细胞，它们的最初来源是相同的，都来自造血组织。

应用^[4][5]

用于诱导T-淋巴瘤干细胞及其对中药提取物长春花碱的耐药性研究

将CHIR99021和PD173074川于T淋巴瘤肿瘤干细胞的筛选和培养,筛选富集和鉴定Hut-102肿瘤细胞球,并观察诱导后具有肿瘤于细胞特征的Hut-102细胞球,是否对中药提取物长春新碱有较强耐受性并初步探讨其对长春新碱耐受的机制。

目的：采用非贴壁细胞球无血清培养法,来体外构建并鉴定了T-淋巴瘤干细胞,观察诱导的T-淋巴细胞瘤细胞球对中药抗肿瘤药长春新碱的耐受性并初步探讨其耐受性的机制。

方法：筛选富集肿瘤干细胞：通过悬浮细胞培养法来回收大量Hut-102细胞中的细胞球,并通过分化抑制剂的CHIR99021和PD173074抑制剂进行癌症干细胞的提取。

鉴定肿瘤干细胞：通过逆转录PCR法来检测Sox2、OCT4、Nanog、Klf4、Bmil、C-Myc干细胞特征基因表达；通过Western blOt进一步验证细胞内OCT4蛋白表达；通过流式细胞术分析细胞表面抗原CD34、CD44勺表达；采用溴化乙锭法检测细胞内周期分布情况；通过CFDA-SE荧光染料观察淋巴细胞增殖的情况；将已富集到的Hut-102细胞球通过尾静脉移植到裸鼠异体内,确定其具有体内移植能力。

观察耐受性并初步探讨机制。用CCK8观察诱导T-淋巴细胞瘤细胞球对抗肿瘤药阿霉素以及中药长春新碱耐受性；用PCR检测诱导T-淋巴细胞瘤细胞球耐药相关基因的表达。

参考文献

[1]Screening for Marine Natural Products with Potential as Chemotherapeutics for Acute Myeloid Leukemia[J].Espen Hansen,Jeanette H.Andersen.Current Pharmaceutical Biotechnology.2016(1)

[2]LncRNA‐Hh Strengthen Cancer Stem Cells Generation in Twist‐Positive Breast Cancer via Activation of Hedgehog Signaling Pathway[J].Mingli Zhou,Yixuan Hou,Guanglun Yang,Hailong Zhang,Gang Tu,Yan‐e Du,Siyang Wen,Liyun Xu,Xi Tang,Shifu Tang,Li Yang,Xiaojiang Cui,Manran Liu.Stem Cells.2016(1)

[3]Multiple ABC Transporters Efflux Baicalin[J].Bernadett Kalapos‐Kovács,Balázs Magda,Márton Jani,Zsolt Fekete,Pál T.Szabó,István Antal,Péter Krajcsi,Imre Klebovich.Phytother.Res..2015(12)

[4]ABCC5 is required for cAMP-mediated hindgut invagination in sea urchin embryos[J].Shipp Lauren E.,Hill Rose Z.,Moy Gary W.,Go?k?rmak Tufan,Hamdoun Amro.Development.2015(20)

[5]王珊珊.诱导T-淋巴瘤干细胞及其对中药提取物长春花碱的耐药性研究[D].北京中医药大学,2015.