B16-F1小鼠黑色素瘤细胞的应用

背景^[1-3]

B16-F1小鼠黑色素瘤细胞源于C57BL/6J小鼠黑色素瘤，可以产生黑色素，同基因小鼠体内移植可成瘤。

黑色素瘤，通常是指恶性黑色素瘤，是黑色素细胞来源的一种高度恶性的肿瘤，简称恶黑，多发生于皮肤，也可见于黏膜和内脏，约占全部肿瘤的3%。

黑色素细胞是一种皮肤里的特殊的细胞，它产生黑色素，传递给周围的角质形成细胞。黑色素停留在这些角质形成细胞的细胞核上起保护作用，防止染色体受到光线辐射受损。

黑色素细胞产生的黑色素防止阳光对人体皮肤的辐射导致的细胞染色体受损。黑色素细胞能合成并分泌黑色素，因此是一种腺细胞。然而黑色素的生物合成非常复杂，是通过色体（未成熟的黑色素）内酪氨酸—酪氨酸酶反应形成的。

细胞处理方法：

1.细胞在培养瓶中培养至状态良好后灌满培养基运输，获得细胞后用酒精棉球擦拭瓶口消毒，然后在超净台中操作。

2.如细胞生长至70%-80%，将瓶中的培养基移入无菌瓶中留作培养使用，保留5-8mL培养基在37℃、5%的CO2的温箱中继续培养。细胞培养至90%-100%后，按要求消化传代。

3.弃去培养基，用无菌PBS或者其他缓冲液清洗细胞2次，加入适量胰蛋白酶消化（EDTA胰酶），待细胞完全脱壁后加培养基吹打混匀，分瓶培养。

应用^[4][5]

用于湘西龙山百合对小鼠B-16黑色素瘤细胞黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响研究

观察不同浓度湘西龙山百合提取液对小鼠B-16细胞细胞活力、黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响。

方法:选用同一传代小鼠B-16黑色素瘤细胞并分组,分别加入百合提取液、维生素C（维生素C溶液稀释成0.01,0.02,0.04,0.08g/L的浓度,根据所测定的百合提取液中维生素C含量按比例稀释成4组浓度的百合溶液）2种溶液作用3天后,用MTT法测定B-16细胞活力;用Maeda等的方法测定B-16细胞酪氨酸酶活性;用Victoria等的方法测定B-16细胞黑色素含量。

结果:1.MTT法测定B-16细胞活力湘西龙山百合提取液、维生素C对小鼠B-16细胞的细胞活力抑制作用随浓度的增加而增大,说明百合提取液的细胞毒性作用强于维生素C,两组各浓度间差异有统计学意义（P<0.01）,两组组间计较有统计学意义（P<0.05）。

2. Maeda等的方法测酪氨酸酶活性湘西龙山百合提取液和维生素C对酪氨酸酶活性呈浓度依赖性抑制,两组各浓度间差异有统计学意义（P<0.01）;且百合提取液对酪氨酸酶活性的抑制作用强于维生素C,两组组间比较有统计学意义（P<0.05）。

3.Victoria等的方法测黑色素含量湘西龙山百合提取液和维生素C随浓度的增加对细胞黑色素的合成的抑制率增加,百合提取液对黑色素合成抑制率优于维生素C,百合提取液浓度在0.08g/L时对细胞合成的抑制率,两组各浓度间差异有统计学意义（P<0.01）,同浓度时两组比较有统计学意义（P<0.05）。

参考文献

[1]Structure and function of the epidermis related to barrier properties[J].Adone Baroni,Elisabetta Buommino,Vincenza De Gregorio,Eleonora Ruocco,Vincenzo Ruocco,Ronni Wolf.Clinics in Dermatology.2012(3)

[2]Antimicrobial,anti-inflammatory and mutagenic investigation of the South African tree aloe（Aloe barberae）[J].A.R.Ndhlala,S.O.Amoo,G.I.Stafford,J.F.Finnie,J.Van Staden.Journal of Ethnopharmacology.2009(3)

[3]In vitro evaluation of UV opacity potential of Aloe vera L.gel from different germplasms[J].M.Shyam Kumar,P.K.Datta,S.Dutta Gupta.Journal of Natural Medicines.2009(2)

[4]Survey and mechanism of skin depigmenting and lightening agents[J].ShoukatParvez,MoonkyuKang,Hwan‐SuckChung,ChongwoonCho,Moo‐ChangHong,Min‐KyuShin,HyunsuBae.Phytother.Res..2006(11)

[5]龚坚.湘西龙山百合对小鼠B-16黑色素瘤细胞黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响[D].湖南中医药大学,2016.