SUPER TUBE狗肾细胞的应用

背景^[1-3]

SUPER TUBE狗肾细胞是从表观正常的成年雌性可卡犬中建立了细胞株MDCK(ATCCCCL-34)，从中克隆建立了狗上皮样细胞株SuperTube。当维持高细胞浓度时，Supertube形成大量的小管(据报道，24孔板的每孔铺7x105细胞，３天内就能形成小管)。要形成小管，细胞需要每天两次换液以提供足够养分。与原始细胞株相比，SuperTube的c-AMP的检测水平低得多，在forskolin刺激下读出的腺苷环化酶水平也低；它的跨上皮抗性也比SuperDome(ATCCCRL-2286)和MDCK都低。

培养液成分：

体外细胞培养所需营养物质与体内基本相同，例如，需要糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等。将细胞所需的上述物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境，因此在使用合成培养基时，通常需加入血清、血浆等一些天然成分。

培养条件：

无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理，通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。此外应定期更换培养液，以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。营养物质：无机物（无机盐、微量元素等），有机物（糖、氨基酸、促生长因子等）；血清和血浆(提供细胞生长必须的营养成份)；温度和pH（36.5±0.5℃，7.2～7.4）；气体环境（95%的空气+5%CO₂的混合气体）；其中5%CO₂气体是为保持培养液的pH稳定。

应用^[4][5]

用于狗肾细胞培养条件优化研究

探讨狗肾细胞培养影响因素,优化狗肾细胞培养条件。

方法：将狗肾细胞以1×104的密度接种到96孔板上,改变狗肾细胞的培养条件:不同的温度（35℃、36℃、37℃）、不同的培养基（MEM、DMEM、1640）、不同p H值（p H=6.4、6.7、7.0、7.2、7.5）、不同浓度的牛血清（0%、2.5%、5%、10%、15%）、不同浓度的L-谷氨酰胺（0、1、2、4 mmol/L）、不同浓度的4-羟乙基哌嗪乙磺酸（0、50、100、150 mmol/L）、不同浓度的CO2（0%、5%）,每日观察细胞形态变化,并在24、48、72、96、120、144 h加入CCK-8测450 mm下的OD值,用OD值的倍数绘制MDCK细胞的增长曲线,比较不同生长条件对MDCK细胞增殖的影响。

结果：狗肾细胞的培养条件为:37℃、5%浓度的CO2、DMEM培养基、p H值6.77.2、5%10%胎牛血清、4 mmol/L-谷氨酰胺、50100 mmol/L的4-羟乙基哌嗪乙磺酸。结论可以根据工作需要,调节牛血清浓度和温度高低,来加速或减慢MDCK细胞的增殖速度。

参考文献

[1] Plaque assay and primary isolation of influenza a viruses in an established line of canine kidney cells(MDCK)in the presence of trypsin[J].K.Tobita,A.Sugiura,C.Enomoto,M.Furuyama.Medical Microbiology and Immunology.1975(1)

[2] Plaque assay and primary isolation of influenza a viruses in an established line of canine kidney cells(MDCK)in the presence of trypsin[J].K.Tobita,A.Sugiura,C.Enomoto,M.Furuyama.Medical Microbiology and Immunology.1975(1)

[3] Evaluation of R-Mix FreshCells in shell vials for detection of respiratory viruses.CK Fong,MK Lee,BP Griffith.Journal of Clinical Microbiology.2000

[4] Plaque assay and primary isolation of influenza a viruses in an established line of canine kidney cells(MDCK)in the presence of trypsin[J].K.Tobita,A.Sugiura,C.Enomoto,M.Furuyama.Medical Microbiology and Immunology.1975(1)

[5]马萍,梦瑶,李欣玥,胡侃.狗肾细胞培养条件优化[J].现代预防医学,2017,44(18):3379-3384.