人睾丸血管内皮细胞的应用

背景^[1-3]

人睾丸血管内皮细胞位于中肾，在胚胎发育时从中肾迁移出来，在睾丸索形成过程中形成睾丸脉管系统。内皮细胞的迁移也很重要，因为它们通过建立睾丸支持细胞和生殖细胞，启动睾丸索的形成。

最近研究表明，破坏睾丸脉管的发育会阻断睾丸纽带的形成，从而妨碍了睾丸的正常结构发育。

另外，研究表明，睾丸血管内皮细胞有与大脑内皮细胞相似的特性，参与了血睾屏障的建立。人睾丸血管内皮细胞是一个可以用于了解睾丸生育障碍中血管缺陷的体外模型，也可为男性生殖障碍的治疗提供新的观点。

血管内皮细胞通常指衬于心、血管和淋巴管内表面的单层扁平上皮，也称内皮细胞。在炎症时高表达黏附分子，与血流中白细胞表面黏附分子相互作用，从而介导白细胞穿越血管壁。亦属一类非专职抗原提呈细胞。

内皮细胞较间皮细胞小，排列紧密。内皮细胞或血管内皮是一薄层的专门上皮细胞，由一层扁平细胞所组成。它形成血管的内壁，是血管管腔内血液及其他血管壁（单层鳞状上皮）的接口。内皮细胞是沿着整个循环系统，由心脏直至最小的微血管。

应用^[4][5]

用于上皮细胞型钠通道α亚型对精子活力的影响及相关机制的初步探讨研究

首先运用western-blot、免疫荧光检测ENaC-α在大鼠和人的睾丸、精子上的表达和定位。

初步的结果支持猜测,即ENaC-α很可能参与精子活力的调控。为了证实这种推测,继而使用计算机辅助精液分析检测ENaC-α的阻断剂EIPA（5-（N-ethyl-N-isopropyl）-amiloride hydrochloride）对精子活力的影响。

回顾整个研究过程,我们在实验中研究了上皮细胞钠离子通道α亚基（ENaC-α）在大鼠和人的睾丸、精子上的表达及其与精子活力之间的关系,并初步探讨ENaC-α在精子活力调控中的可能作用机制。

检测ENaC-α在大鼠和人的睾丸、精子上的表达本部分的主要实验目的是研究上皮细胞钠离子通道α亚基（ENaC-α）在大鼠和人的睾丸及精子上是否表达。鉴定一种蛋白质分子是否存在于某种组织或细胞,最经典的方法就是蛋白质免疫印迹技术（western-blot）。

从组织或培养细胞中提取的蛋白质样品经过十二烷基硫酸钠-丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS PAGE）和转膜,固定于硝酸纤维素膜。通过特异一抗和相应二抗（碱性磷酸酶或者过氧化物酶标记）的应用,目的蛋白分子被高度特异性地“辨识”。加入含有发光底物的溶液后,二抗上结合的辣根过氧化物酶作用于底物发出荧光使医用胶片曝光,最终得到记录有实验结果的胶片。

该实验方法灵敏度非常高,不但可以鉴定蛋白有无和分子量大小,还可以半定量检测目的蛋白在组织或培养细胞中的丰度。实验的结果证实,上皮细胞钠离子通道α亚基（ENaC-α）在大鼠和人的睾丸及精子上都有表达。其分子量约为75KD。二

疫荧光和免疫组化染色检测ENaC-α在大鼠和人的睾丸、精子上的定位通过上面实验我们证实上皮细胞钠离子通道α亚基（ENaC-α）在大鼠和人的睾丸及精子上都有表达。

参考文献

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[2]Molecular Architecture of the Sperm Flagella:Molecules for Motility and Signaling[J].Kazuo Inaba.Zoological Science.2003(9)

[3]Transient receptor potential(TRPC)channels in human sperm:expression,cellular localization and involvement in the regulation of flagellar motility[J].FEBS Letters.2003(1)

[4]Presence of Cyclic Nucleotide Phosphodiesterases PDE1A,Existing as a Stable Complex with Calmodulin,and PDE3A in Human Spermatozoa1[J].Linda Lefiè,vre,Eve de Lamirande,Claude Gagnon.Biology of Reproduction.2002(2)

[5]孔祥斌.上皮细胞型钠通道α亚型对精子活力的影响及相关机制的初步探讨[D].华中科技大学,2007.