CTLL-2小鼠T细胞的应用

背景^[1-3]

CTLL-2小鼠T细胞是一株具有细胞毒作用的IL-2依赖型的T-细胞株。

T淋巴细胞来源于骨髓的多能干细胞（胚胎期则来源于卵黄囊和肝）。在人体胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干细胞或前T细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。

成熟的T细胞经血流分布至外周免疫器官的胸腺依赖区定居，并可经淋巴管、外周血和组织液等进行再循环，发挥细胞免疫及免疫调节等功能。T细胞的再循环有利于广泛接触进入体内的抗原物质，加强免疫应答，较长期保持免疫记忆。

细胞毒性T淋巴细胞（CTL），是白细胞的亚部，为一种特异T细胞，专门分泌各种细胞因子参与免疫作用。对某些病毒、肿瘤细胞等抗原物质具有杀伤作用，与自然杀伤细胞构成机体抗病毒、抗肿瘤免疫的重要防线。

细胞毒性T淋细胞又称杀伤性T淋巴细胞，是机体抗肿瘤机制的重要环节，也是肿瘤免疫过继疗法主要效应细胞之一。

靶细胞膜损伤后所致的细胞破裂和DNA断裂引起的核崩解促使靶细胞死亡，至此过程CTL可产生多种细胞毒介质杀伤祝细胞，这些介质包括：穿孔素、丝氨酸酯醇、干扰素和肿瘤坏死因子，这4种介质中，穿孔素的杀伤机制是当杀伤细胞粘着在配细胞膜上，前者胞质含有的穿孔素颗粒在高浓度Ca2+存在下被降解，释放穿孔素单位进入细胞间隙，通过聚合作用在靶细胞膜上形成跨膜通道，导致胶体渗透破坏细胞。

应用^[4][5]

用于ZEA、DON及其联合染毒诱导CTLL-2细胞凋亡及信号途径研究

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol,DON）和玉米赤霉烯酮（Z earalenone,ZEA）是饲料中两种最常见的霉菌毒素。ZEA和DON可降低饲料的营养价值,导致动物生长性能和繁殖性能下降,还具有免疫抑制作用,可导致畜禽对疫病的抵抗力大大下降。

目前,人们并没有完全搞清ZEA和DON免疫毒性作用及其机理。另外,自然情况下,ZEA和DON在饲料中的常共同存在,研究它们对畜禽造成的联合免疫毒性作用及其机理对ZEA和DON中毒的防控更具有指导意义,特别是可以为饲料中这两种霉菌毒素限量标准的制定提供依据。

为揭示ZEA和DON及其联合作用的免疫毒性和分子机理,研究以CTLL-2细胞（细胞毒性T淋巴细胞株）为材料,进行了不同浓度的ZEA、DON及联合染毒试验,利用CCK-8法、酶联免疫吸附法、流式细胞术和免疫印迹法等技术检测了细胞毒性、免疫相关细胞因子分泌、细胞凋亡率及凋亡相关信号蛋白表达等变化情况。

DON、ZEA对CTLL-2细胞毒性作用及联合染毒浓度确定。用不同浓度的ZEA（0、2.5、5、10、20、40μg/mL）、DON（0、0.25、0.5、1、2、4μg/mL）处理CTLL-2细胞48h。用CCK-8法检测不同浓度的DON、ZE A对CTLL-2细胞的细胞活力的影响。

结果表明,随着ZEA、DON浓度的升高,CTLL-2细胞的细胞活力下降,与对照组相比,0.25μg/mL DON染毒组差异不显著,0.5μg/mL及以上DON染毒组差异极显著（P<0.01）；与对照组相比,ZEA染毒组均有显著性差异或极显著性差异（P<0.05或P<0.01）；与对照组相比,0.25μg/mL DON+2.5μg/mL ZEA及以上联合染毒组细胞活力下降（P<0.01）。

参考文献

[1]Cadmium Induces Thymocyte Apoptosis via Caspase‐Dependent and Caspase‐Independent Pathways[J].Neelima Pathak,Sumonto Mitra,Shashi Khandelwal.J Biochem Mol Toxicol.2013(3)

[2]Co-exposure of Fusarium mycotoxins:In vitro myelotoxicity assessment on human hematopoietic progenitors[J].A.S.Ficheux,Y.Sibiril,D.Parent-Massin.Toxicon.2012(6)

[3]Involvement of mitochondria-mediated apoptosis in deoxynivalenol cytotoxicity[J].Fatma Bensassi,Cindy Gallerne,Ossama Sharaf El Dein,Christophe Lemaire,Mohamed Rabeh Hajlaoui,Hassen Bacha.Food and Chemical Toxicology.2012(5)

[4]Zearalenone induces apoptosis and necrosis in porcine granulosa cells via a caspase‐3‐and caspase‐9‐dependent mitochondrial signaling pathway[J].

[5]潘顺叶.ZEA、DON及其联合染毒诱导CTLL-2细胞凋亡及信号途径研究[D].扬州大学,2016.