普通级马血清的应用

背景^[1-3]

普通级马血清采自健康马，促细胞生长效用一般，无菌、无支原体，血红蛋白含量小于20mg/ml，总蛋白含量大于5.00g/dl。主要适用于微生物培养及诊断试剂生产。

血清是由血浆去除纤维蛋白原而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清是血浆中不含纤维蛋白原的胶状液体,具有维持血液的正常粘度、酸碱度、渗透压等作用。

它主要由水和各种化学成分组成，这些化学成分包括白蛋白，α1、α2、β、γ-球蛋白，甘油三酯，总胆固醇，谷丙转氨酶等。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。对血清的成分和作用的研究虽有很大进展，但仍存在一些问题。

普通级马血清在细胞培养中主要作用

1提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。

2提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。

3提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要的低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。

4提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。

5对培养中的细胞起到某些保护作用：有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。

应用^[4][5]

用于补阳还五汤对PAF诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用研究

究结合缺血性神经损伤中已探明的病理生理机制,建立缺氧损伤神经细胞模型,观察其对缺氧PC12细胞损伤模型细胞形态学、存活力及上清液中PAF含量的影响,探讨补阳还五汤含药血清对缺氧损伤PC12细胞的保护作用,为进一步研究该方神经细胞损伤保护作用,反映该方对神经细胞损伤过程的多环节干预,筛选出对神经细胞损伤有保护作用的有效成分提供实验依据。目的：探讨补阳还五汤含药血清对缺氧损伤PC12细胞的保护作用。

方法：1、实验动物、分组及模型建立：普通级新西兰兔6只,随机分为：正常组2只（蒸馏水组）、含药血清组2只（补阳还五汤组）、阳性对照组2只（金纳多组）：每组动物分别给予相同体积10ml/kg灌服,1次/d,连续7d。

2、标本的采集及研究方法：末次给药前禁食12 h,给药2h后采血（耳中央动脉）制备含药血清。将已80%融合的PC12细胞分为6组,补阳还五汤（BYHWD）含药血清高剂量组（10%）,补阳还五汤（BYHWD）含药血清低剂量组（2.5%）,阳性对照组（金纳多含药血清5%）,空白血清组（正常兔血清5%）,模型组（无兔血清）,正常组（正常培养含牛、马血清各5%）,按相应分组更换含药血清培养基。

将已分组加药的PC12细胞置于37℃、5%CO2和90%氮气的三气培养箱内,制作缺氧模型。①PC12细胞形态学观察,缺氧1.5h,3h,18h后,用倒置显微镜观察细胞形态的变化,并用图像采集系统进行拍摄；

②缺氧造模18h后,MTT法检测细胞存活力；

③缺氧造模1.5 h后,Annexin V/PI检测细胞凋亡率；

④缺氧造模1.5h后,酶联免疫法（Elisa法）检测培养上清PAF含量。

参考文献

[1]Cyclooxygenase-2 mediates platelet-activating factor-induced prostaglandin E 2 release from rat primary astrocytes[J].Lisa A.Teather,Richard J.Wurtman.Neuroscience Letters.2003(3)

[2]Hypoxia/reoxygenation induces cell injury via different mechanisms in cultured rat cortical neurons and glial cells[J].Ju-Yu Wang,Andrew Y.-C Shum,Jia-Yi Wang.Neuroscience Letters.2002(3)

[3]Platelet‐activating factor induces cell death in cultured astrocytes and oligodendrocytes:Involvement of caspase‐3[J].Mary EllenHostettler,Pamela E.Knapp,Sonia L.Carlson.Glia.2002(3)

[4]Neuroprotection in cerebrovascular disease[J].Jain.Expert Opinion on Investigational Drugs.2000(4)

[5]郭咏霞.补阳还五汤对PAF诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用[D].南方医科大学,2011.