MEM培养基的应用

背景^[1-3]

MEM培养基是动物细胞培养中的常用的培养基，主要是贴壁细胞的培养，修改配方后也可用于其他类型细胞培养。也称最低必需培养基、最小基本培养基或低限量Eagle培养基，由Harry Eagle在Eagle基本培养基(BEM)的基础上发展而来的，是一种最基本、适用范围最广的培养基，是动物细胞培养中最常用的培养基之一。

MEM培养基仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素，成分简单，主要用于贴壁细胞的培养，配方修改后也可用于其他类型细胞培养。

MEM含NEAA(非必须氨基酸)的培养基，是在MEM培养基的基础上添加L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-天(门)冬酰胺、L-天(门)冬氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸和甘氨酸7种NEAA，能降低细胞培养时细胞自身生产非必须氨基酸的副作用，有效促进细胞增殖代谢。

操作步骤：

1.配置前准备：配置培养基新制备的milli water。调节pH值的酸碱溶液也应该使用这种水配置。制备培养基的器皿清洗干净，并用milli water润洗两次。

2.溶解培养基：取5%终体积的milli water，加入到1L玻璃杯中，将干粉培养基倒入烧杯，水洗包装袋内面两次，倒入培养液中。磁力搅拌助溶。

3.补加试剂：根据包装袋说明加入NaHCO3(2.2g)，HEPES(2.383,10mmol)、非必需氨基酸(可不加，10ml)。

4.加抗生素：一般抗生素终浓度——青霉素100U/ml，链霉素100U/ml。1L加入10m储备液。

5.调pH值：加水到1000ml，然后用HCL或者NaOH调节pH到7.2。

6.过滤除菌：采用0.22um滤膜。过滤后分装于小瓶中(100或200ml)。过滤后pH值一般上升0.1-0.3。

7.加小牛血清：根据培养基配置的量将小牛血清分装，冷冻保存(-20度)。临用前将加入小牛血清10%。

应用^[4][5]

用于人肾细胞癌ACHN失巢凋亡抵抗细胞生物学行为特性及其分子机制的体外研究

以人肾细胞癌ACHN细胞株为研究对象，初步建立人肾细胞癌失巢凋亡抵抗细胞模型。并以RAF-MEK-ERK、PI3K-Akt信号转导通路及Mcl-1、TrkB为研究靶点，以RAF-MEK-ERK信号转导通路抑制剂Sorafenib及受体TrkB的特异性酪氨酸激酶抑制剂K252a为处理因素，采用siRNA靶向沉默TrkB基因的方法，体外研究人肾细胞癌ACHN细胞株发生失巢凋亡抵抗后其生物学行为特性的改变及其可能的分子机制，以期为预防和治疗RCC的转移提供新的思路和途径。

采用超低粘附培养板悬浮培养后重贴壁的方法，诱导获得人肾细胞癌ACHN失巢凋亡抵抗细胞，倒置相差显微镜观察其形态学改变；AO（吖啶橙）/EB（溴乙锭）双染色法观察ACHN贴壁培养和悬浮培养的凋亡情况；MTT法、平板克隆形成实验、AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞仪检测凋亡率、划痕实验及Transwell实验检测诱导获得的人肾细胞癌ACHN失巢凋亡抵抗细胞生物学行为特性方面的变化。

结果:悬浮培养的人肾细胞癌ACHN细胞株聚集成簇生长，重贴壁培养后细胞由排列整齐、形状规则的梭形变成有较多突起、排列紊乱的不规则多角形。人肾细胞癌ACHN细胞株贴壁培养和悬浮培养72h后，AO/EB双染色后在荧光显微镜下观察，可见贴壁培养的ACHN细胞生长良好，而悬浮培养的ACHN细胞则大量凋亡。ACHN失巢凋亡抵抗细胞的增殖力、克隆形成能力、抗失巢凋亡能力、细胞迁移力和侵袭力均显著高于ACHN亲本细胞（P＜0.05）。

参考文献

[1]The RAS/RAF/MEK/ERK and the PI3K/AKT signalling pathways:role in cancer pathogenesis and implications for therapeutic approaches[J].Antonella De Luca,Monica R Maiello,Amelia D’Alessio,Maria Pergameno,Nicola Normanno.Expert Opinion on Therapeutic Targets.2012(S2)

[2]Metastatic function of BMP-2 in gastric cancer cells:The role of PI3K/AKT,MAPK,the NF-κB pathway,and MMP-9 expression[J].Myoung Hee Kang,Sang Cheul Oh,Hyun Joo Lee,Han Na Kang,Jung Lim Kim,Jun Suk Kim,Young A.Yoo.Experimental Cell Research.2011(12)

[3]Blocking the PI3K/AKT and MEK/ERK signaling pathways can overcome Gefitinib-resistance in non-small cell lung cancer cell lines[J].H Li,G Schmid-Bindert,D Wang,Y Zhao,X Yang,B Su,C Zhou.Advances in Medical Sciences.2011(2)

[4]Targeting anoikis resistance in prostate cancer metastasis[J].Shinichi Sakamoto,Natasha Kyprianou.Molecular Aspects of Medicine.2010(2)

[5]邢增术.人肾细胞癌ACHN失巢凋亡抵抗细胞生物学行为特性及其分子机制的体外研究[D].华中科技大学,2012.