人胰腺癌细胞SW1990的应用

背景^[1-3]

人胰腺癌细胞SW1990是1978年从一II级胰腺癌的脾转移中分离建系。可在裸鼠中成瘤。胰腺癌(Pancreatic carcinoma)主要指胰外分泌腺腺癌，是胰腺恶性肿瘤中最常见的一种，约占全身各种癌肿的1%～4%，占消化道恶性肿瘤的8%～10%。通常论及胰腺癌时也同时论及壶腹周围癌，前者为胰腺本身，后者则包括胆总管下端、壶腹、十二指肠乳头及胰头的癌，其恶性程度以胰腺癌为最高，其数量也以胰腺癌为最多，约占3/5。

细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）SW1990人胰腺癌细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

传代方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

用于姜黄素对人胰腺癌细胞SW1990增殖及凋亡的影响及其机制研究

通过观察姜黄素对人胰腺癌细胞SW1990增殖、凋亡及Wnt/β-catenin信号传导通路相关基因表达，研究姜黄素对人胰腺癌细胞的影响；并利用表面等离子体共振和分子虚拟对接技术，研究姜黄素与Wnt通路的相互作用机制，以探讨姜黄素的抗肿瘤作用。

方法：应用MTT法检测不同浓度姜黄素(20、40、60、80、100μmol/L)对人胰腺癌细胞SW1990增殖的抑制作用，用流式细胞仪分析细胞的凋亡率，用WesternBlot方法检测姜黄素对β-catenin蛋白表达的影响，用半定量PCR法检测靶基因VEGF、cyclinD1和c-myc在不同浓度姜黄素作用下的表达情况变化。应用BIAcore分子相互作用实验观察姜黄素的作用方式，用分子虚拟对接技术发现姜黄素与Wnt蛋白某区域的结合位点。

结果：姜黄素通过抑制Wnt信号传导通路，对肿瘤细胞的生物学行为影响的实验研究发现：①在不同浓度姜黄素的作用下，胰腺癌SW1990细胞在48小时后，细胞增值抑制率为正相关性，且浓度越大，增殖抑制率越明显，并呈浓度效应关系（P<0.05）。

②流式细胞仪检测到，在姜黄素作用于胰腺癌细胞后的48小时，细胞凋亡的百分比随着药物浓度的增加而增高（P<0.05）。

③WesternBlot检测显示：胰腺癌细胞SW1990经姜黄素作用48h后的实验组细胞，胞浆β-catenin蛋白含量低于空白对照组。在SW1990细胞中，除20μmol/L浓度组外，其他浓度组与空白对照组比较均有统计学意义（P<0.05）。药物浓度越大，胞浆β-catenin蛋白含量越少，呈剂量依赖性（r=-0.96，P<0.05）。

参考文献

[1]Pancreatic cancer[J].Audrey Vincent,Joseph Herman,Rich Schulick,Ralph H Hruban,Michael Goggins.The Lancet.2011(9791)

[2]The Targets of Curcumin[J].Hongyu Zhou,Christopher S.Beevers,Shile Huang.Current Drug Targets.2011(3)

[3]Curcumin protects pre-oligodendrocytes from activated microglia in vitro and in vivo[J].Liu-fang He,Hui-jin Chen,Long-hua Qian,Guan-yi Chen,Jeffrey S.Buzby.Brain Research.2010

[4]The inhibitory effect of turmeric curcuminoids on matrix metalloproteinase-3 secretion in human invasive breast carcinoma cells[J].Mathanaporn Boonrao,Supachai Yodkeeree,Chadarat Ampasavate,Songyot Anuchapreeda,Pornngarm Limtrakul.Archives of Pharmacal Research.2010(7)

[5]李立方.姜黄素对人胰腺癌细胞SW1990增殖及凋亡的影响及其机制研究[D].河南大学,2014.