脑心浸出液琼脂的应用

背景^[1-3]

脑心浸出液琼脂用于链球菌和肠球菌及其它对营养苛求菌的培养，成分：脑心浸出粉8.0g，动物组织胃酶消化物5.0g，胰酪蛋白胨16.0g，氯化钠5.0g，磷酸氢二钠2.5g，葡萄糖2.0g，琼脂13.5g，pH7.4±0.2(25℃)。

检验原理

胰蛋白质胨和牛心浸粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖可为多种细菌提供能源；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钠为缓冲剂。

用法：称取本品50.1g加入1000ml蒸馏水，加热溶解并不停搅拌，煮沸不要超过1分钟。分装三角瓶，121℃高压灭菌15分钟。取1ml制备好的样品液加入直径为9cm无菌平皿中心，倾入冷却至45-50℃培养基约15ml，混匀，凝固后，36±1℃倒置培养18～24h。或冷却至45-50℃时，倾入无菌平皿，琼脂完全凝固后，在37℃的培养箱中倒置放置1-2小时，加入适当稀释度的样品液1ml，涂布于培养基上，36±1℃培养18～24h。

链球菌是化脓性球菌的另一类常见的细菌，广泛存在于自然界和人及动物粪便和健康人鼻咽部，大多数不致病。医学上重要的链球菌主要有化脓性链球菌、草绿色链球菌、肺炎链球菌、无乳链球菌等。引起人类的疾病主要有：化脓性炎症、毒素性疾病和超敏反应性疾病等。

肠球菌（Enterococcus）属肠球菌属，是人类和动物肠道正常菌群的一部分，通常在引起腹腔和盆腔感染所分离的混合菌丝中发现，既往认为肠球菌是对人类无害的共栖菌，但近年研究已证实了肠球菌的致病力。在需氧革兰阳性球菌中，它是仅次于葡萄球菌的重要院内感染致病菌，肠球菌亦可引起院外感染。肠球菌不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染，还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等。

应用^[4][5]

用于医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子流行病学研究研究

应用多重PCR方法对医院内感染的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA,Methicillin-resistant Staphylococcus aureus）进行葡萄球菌染色体mec元件（SCCmec）分型,以发现MRSA院内感染的流行病学分布特征,为分析MRSA造成医院内感染的传播途径、发生机理及降低MRSA院内感染的发生率奠定基础。方法:收集临床分离的96株金黄色葡萄球菌,其中痰标本74株;血液标本3株;腹腔引流物1株;伤口分泌物15株;尿液1株;胸腔引流物1株;足部脓肿标本1株。

应用Vitek全自动生化分析仪鉴定金黄色葡萄球菌,按NCCLS2002年第十二版操作指南,应用K-B法进行抗生素敏感试验;

应用琼脂稀释法测定每株菌对苯唑青霉素的最低抑菌浓度（MIC）值;鉴定后的菌株置于含脑心浸出液的培养管中培养进行增菌培养;

常规方法提取MRSA细菌DNA后,应用多重PCR方法对MRSA进行SCCmec基因分型,并结合临床资料分析。

结果:药敏实验结果显示96株MRSA对青霉素及环丙沙星均耐药,苯唑青霉素的MIC为64—1024mg/L,对红霉素、四环素、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑、克林霉素的耐药率分别为98.9%、98.9%、94.7%及100%,对万古霉素全部敏感。

SCCmec分型结果显示96株MRSA中有91株属于SCCmec-Ⅲ型;1株属于SCCmec-ⅢA亚型;2株属于SCCmec-Ⅳ型;1株属于SCCmec-Ⅰ型;1株属于未定型株（NT SCCmec型）。

菌株科室分布情况为神经科25株;呼吸科15株;老年病科12株;神经外科10株;内分泌科6株;矫形科4株;心内科4株;肝胆外科3株;创伤外科3株;风湿科2株;胸外科2株;普外科2株;泌尿科2株;烧伤科1株;ICU1株;急诊室1株;耳鼻喉科1株;皮肤科1株;消化科1株。其中SCCmec-ⅢA亚型来源于神经外科;SCCmec-Ⅳ型来源于呼吸科和矫形科;SCCmec-Ⅰ型来源于内分泌科。

参考文献

[1]Denaturing gradient gel electrophoretic multilocus sequence typing of Staphylococcus aureus isolates[J].VolkerGürtler,Helen D.Barrie,Barrie C.Mayall.ELECTROPHORESIS.2002(19)

[2]Secrets of success of a human pathogen:molecular evolution of pandemic clones of meticillin-resistant Staphylococcus aureus[J].Duarte C Oliveira,Alexander Tomasz,Hermínia de Lencastre.The Lancet Infectious Diseases.2002(3)

[3]Handwashing frequencies in an intensive care unit[J].S.Karabey,P.Ay,S.Derbentli,Y.Nakipoglu,F.Esen.Journal of Hospital Infection.2002(1)

[4]Evaluation of bedmaking-related airborne and surface methicillin-resistant Staphylococcus aureus contamination[J].T.Shiomori,H.Miyamoto,K.Makishima,M.Yoshida,T.Fujiyoshi,T.Udaka,T.Inaba,N.Hiraki.Journal of Hospital Infection.2002(1)

[5]马为.医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子流行病学研究[D].暨南大学,2008.