小鼠血清的应用

背景^[1-3]

小鼠血清采用健康小鼠血液为原料，经无菌采集、分离、微孔过滤后而成，性状为澄清液体，无噬菌体、低内毒素，无溶血无异物无细菌真菌支原体霉形体衣原体等，适用于试验室或生化科研相关试验，满足不同科研实验的多种需求。

小鼠血清可用于1.动物免疫、血清IgG制备。2.病理组化封闭、ELISA等免疫实验中的封闭及保护剂的使用。3.细胞体外培养相关实验。

小鼠血清来源于非免疫的小鼠宿主，经过脂质萃取和含NaN3的PBS溶液透析，改善其透明度。在病理组化封闭中推荐用PBS将封闭血清原液稀释5-20倍，配成5%-20%的工作液，直接滴加在组织切片或者细胞涂片上，37℃度孵育10-30分钟，清除血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃过夜。

在细胞培养中培养细胞用的培养基为人工合成，但动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，加入动物血清是为了给体外培养的细胞提供一个类似生物体内的环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶,可以促进细胞的发育。主要作用有：

1、提供基本营养物质或合成培养基所缺乏的营养物质：如氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等；

2、提供有利于细胞生长增殖所需的激素、生长因子；

3、提供贴壁细胞所需的贴壁因子和扩展因子；

4、对培养中的细胞起到某些保护作用：有一些细胞如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用，使细胞免受蛋白酶的损伤；

5、血清还含有一些微量元素和离子，他们在代谢解毒中起重要作用；

6、血清中的结合蛋白还可消除某些毒素和金属对细胞的毒性作用。

应用^[4][5]

用于瑞香素对小鼠淋巴细胞免疫抑制效果及其作用机制的研究

选用具有较低毒性和潜在免疫抑制活性的DAP进行后续免疫抑制作用的研究。研究旨在研究DAP对小鼠淋巴细胞的免疫抑制作用和基本机制。

前期研究证明在体外，DAP能够抑制ConA和LPS诱导的小鼠脾细胞的增殖反应，提示其对T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖反应有直接的抑制作用。细胞增殖主要是通过细胞周期调控的，细胞周期由不同的连续的阶段（G0/G1，S，G2/M）组成。使用碘化丙啶染色法分析细胞周期分布情况，通过流式细胞术检测发现，随着DAP浓度的增加，处于G0/G1期的细胞数增加，处于S期和G2/M期的细胞数则减少，说明DAP是在G0/G1期阻断DNA合成来抑制小鼠淋巴细胞有丝分裂和细胞过度增殖。细胞因子是免疫系统重要的调节剂和效应剂。

尤其是多种促炎细胞因子已被证明与多种自身免疫性疾病有关。在本研究中，我们使用的ConA作为T细胞有丝分裂原，选择Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ和Th2细胞因子IL-4、IL-6用于检测DAP对Th1和Th2细胞的影响。

结果表明，DAP可以显著抑制ConA诱导的小鼠脾细胞主要细胞因子分泌和mRNA的表达，提示其抑制细胞因子产生的作用环节在mRNA表达阶段。这些研究表明，DAP的免疫抑制作用与抑制细胞因子的产生与分泌有关系。

细胞内Ca2+是一种典型的细胞内信使，它的许多细胞效应是通过钙调蛋白（CaM）转导，Ca2+/CaM复合物调节多种下游目标包括蛋白质激酶和磷酸酶。

其中，与免疫相关的最重要的两条途径是受CaM调节的CaN-NFAT途径和CaMKⅡ-NF-κB途径。

参考文献

[1]Biochemical and biological studies on 2-desamino-2-methylaminopterin,an antifolate the polyglutamates of which are more potent than the monoglutamate against three key enzymes of folate metabolism.Rosowsky A,Galivan J,Beardsley G P,Bader H,O’Connor B M,Russello O,Moroson B A,DeYarman M T,Kerwar S S,Freisheim J H.Cancer Research.1992

[2]Suppressive effect of mizoribine on progression of bovine serum albumin nephritis in mice.Chen X M,Aozuka S,Kobayashi Y.Nihon Jinzo Gakkai shi.1987

[3]Therapeutic potential of B and T lymphocyteattenuator expressed on CD8+T cells for contact hypersensitivity.Nakagomi D,Suzuki K,Hosokawa J,et al.Journal of Investigative Dermatology.2013

[4]Dysregulated phosphorylation of Ca(2+)/calmodulin-dependent protein kinase II-αin the hippocampus of subjects with mild cognitive impairment and Alzheimer’s disease.Reese Lindsay C,Laezza Fernanda,Woltjer Randall,Taglialatela Giulio.Journal of Neurophysiology.2011

[5]宋博翠.瑞香素对小鼠淋巴细胞免疫抑制效果及其作用机制的研究[D].吉林大学,2014.