MDCK无血清培养基的应用

背景^[1-3]

MDCK无血清培养基用于MDCK细胞的传代培养。在整个细胞培养过程中，不需添加血清或替代物。MDCK细胞可直接转入MDCK细胞无血清培养基培养，不需要经过血清浓度逐步降低的细胞驯化过程。

MDCK细胞无血清培养基是一款专门用于培养MDCK细胞的无血清培养基。

MDCK细胞无血清培养基中不含胎牛血清成分，细胞培养过程中也不需要添加任何血清，无血清培养的MDCK细胞可达到完全培养基（DMEM+10%FBS）培养的状态，连续传代50代，细胞特性无改变，生长速率优于完全培养基。MDCK细胞的倍增时间小于20小时。

MDCK细胞无血清培养基化学成分限定，在流感病毒分离中能排除血清中类淀粉蛋白P等物质对病毒吸附的影响，同时，细胞可以直接转入无血清培养基中培养，不需要经过血清浓度逐步降低的驯化过程。

MDCK是S.H.MADIN于1958年9月建成bai，来源于考克斯班尼犬肾脏，该肾du脏细胞原代培养zhi时其形态类似于成纤维细胞，经过胰蛋白酶和EDTA混合消化液的连续6次消化法纯化而上皮样细胞，每次纯化间隔时间为7D。培养中MDCK细胞具有远段肾小管与集合管，来源细胞的分化特性。MDCK细胞株至少有两种细胞类型，一种命名为C5A，其在含I型胶原的培养物中生长时，能分泌液体，导致囊肿形成，但在塑料面的培养低物上培养时，能分泌液体，却不能形成囊肿，另一种细胞正好相反。

应用^[4][5]

用于用于流感疫苗生产的MDCK细胞无血清单细胞悬浮培养体系的开发研究

传统的流感疫苗生产多采用鸡胚培养过程,但该生产过程具易受微生物污染、内毒素残余量高、对流感大流行应急能力差等缺点,因此动物细胞制病毒疫苗工业的发展变得尤为重要。MDCK细胞具有培养容易、增殖快、流感病毒感染效率高等特点,是适合用作流感病毒疫苗生产的重要细胞系之一。

在自制无血清培养基Self-SFM基础上成功开发了适合MDCK细胞无血清培养的培养基MDCK-SFM,细胞比生长速率、细胞活力和细胞密度与有血清培养过程相当。通过调整MDCK-SFM培养基成分,研制出了适合MDCK细胞高密度悬浮培养的无血清培养基MDCK-SHP和低蛋白无血清培养基MDCK-SLP,成功驯化出了适合无血清单细胞悬浮培养的细胞ssf-MDCK。

在无血清培养基MDCK-SHP中培养ssf-MDCK细胞,细胞密度可达38.05×105cells/mL,比生长速率可达0.056 h-1；在低蛋白无血清培养基MDCK-SLP中细胞密度可达22.94×105cells/mL,比生长速率可达0.050 h-1。

另外,利用该MDCK细胞无血清悬浮培养体系,对MDCK细胞生产流感病毒疫苗过程中的操作参数进行了初步优化,在整个细胞培养和病毒疫苗生产过程中无需更换培养基,在病毒感染过程中需添加TPCK-胰酶,感染时TOI为50 h,MOI为0.1,感染病毒48 h后收获病毒液,在无血清培养基MDCK-SHP和低蛋白无血清MDCK-SLP中获得的病毒液的TCID50滴度值分别为1010.85±0.81 TCID50/mL和1011.43±0.73 TCID50/mL。

参考文献

[1]Continuous cell lines as a production system for influenza vaccines[J].Genzel,Reichl.Expert Review of Vaccines.2009(12)

[2]Wave microcarrier cultivation of MDCK cells for influenza virus production in serum containing and serum-free media[J].Vaccine.2006(35)

[3]Two Different Serum-free Media and Osmolality Effect Upon Human 293 Cell Growth and Adenovirus Production[J].Tiago B.Ferreira,Ana L.Ferreira,Manuel J.T.Carrondo,Paula M.Alves.Biotechnology Letters.2005(22)

[4]Effect of refeed strategies and non-ammoniagenic medium on adenovirus production at high cell densities[J].T.B.Ferreira,A.L.Ferreira,M.J.T.Carrondo,P.M.Alves.Journal of Biotechnology.2005(3)

[5]黄锭.用于流感疫苗生产的MDCK细胞无血清单细胞悬浮培养体系的开发[D].华东理工大学,2010.