兔骨髓间充质干细胞完全培养基的应用

背景^[1-3]

兔骨髓间充质干细胞完全培养基特别添加了能有效改善细胞生长状态的营养物质和特别甄选的优质胎牛血清，适合兔骨髓间质干细胞的体外培养。

基础培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需添加天然培养基，常用的是牛血清，因为牛血清中含有促细胞增殖的各种生长因子（Growth Factor）和其它多种有利于细胞生存的物质。此外，为防止污染，培养液中尚需加一定量的抗生素。完全培养基根据添加血清量的多少，可分为细胞生长培养基和细胞维持培养基，用于不同细胞和不同研究。

间充质干细胞是一种多能干细胞，它具有干细胞的所有共性，即自我更新和多向分化能力。在临床应用也最多，与造血干细胞联合应用，可以提高移植的成功率，加速造血重建。当患者接受大剂量化疗后，将间充质干细胞与造血干细胞一同输入，可明显加速患者血细胞恢复时间，且安全无不良反应。

间充质干细胞不仅存在于骨髓中，也存在于骨骼肌、骨外膜和骨小梁中。由于它分化的组织类型十分广泛，因此临床应用价值不菲。

骨髓原始间充质干细胞是骨髓基质干细胞，是人们在哺乳动物的骨髓基质中发现的一种具有分化形成骨、软骨、脂肪、神经及成肌细胞的多种分化潜能的细胞亚群。它们对骨髓中的造血干细胞（HSC）不仅有机械支持作用，还能分泌多种生长因子（如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等）来支持造血。

应用^[4][5]

用于兔骨髓间充质干细胞培养、冻存及体外分化为胰岛β细胞的研究

在体外分离培养兔BM-MSCs的基础上，对冻存细胞的增殖能力、生物学特性进行鉴定，优化并建立稳定的兔BM-MSCs体外定向分化为胰岛β细胞的诱导方法与技术体系。

1. 采用红细胞裂解液法分离获取兔骨髓间充质干细胞（BM-MSCs），基于其贴附塑料基质细胞培养板生长的特性体外扩增培养。通过观察形态学，鉴定细胞表面标志，描绘生长曲线等了解兔BM-MSCs生物学特性。

红细胞裂解液法操作简便、便于复制，能够分离获得高纯度的兔BM-MSCs，细胞生物学特性稳定，增殖活性好。

2. 选取P1，P3，P9代细胞进行冻存复苏，台盼蓝染色检测细胞复苏率，观察冻存时间（15d，30d，90d）对各代（P1，P3，P9代）细胞复苏效果的影响；鉴定冻存细胞的增殖及生物学特性，向脂肪细胞诱导分化验证其干细胞多潜能分化特性。结果表明冻存复苏的兔BM-MSCs可继续培养传代，但其传代次数有限；仍然具有多潜能干细胞特性，可以分化为脂肪细胞。

冻存的兔BM-MSCs生物学性状相对稳定，同样可以应用于组织工程、细胞移植和基因治疗等方面，为解决BM-MSCs的储备、节省材料和时间提供依据。

3.利用DNA甲基化酶抑制剂(5-Aza-dC)，探讨甲基化程度降低是否可以增强胰岛特异基因PDX-1的表达，进而促进胰岛细胞分化和β细胞的成熟。

参考文献

[1]Differentiation of mesenchymal stem cells derived from human bone marrow and subcutaneous adipose tissue into pancreatic islet-like clusters in vitro[J].Dhanasekaran Marappagounder,Indumathi Somasundaram,Sudarsanam Dorairaj,Rajkumar Janavikula Sankaran.Cellular&Molecular Biology Letters.2013(1)

[2]Enhanced Effect of Combining Human Cardiac Stem Cells and Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells to Reduce Infarct Size and to Restore Cardiac Function After Myocardial Infarction[J].Adam R.Williams,Konstantinos E.Hatzistergos,Benjamin Addicott,Fred McCall,Decio Carvalho,Viky Suncion,Azorides R.Morales,Jose Da Silva,Mark A.Sussman,Alan W.Heldman,Joshua M.Hare.Circulation.2013(2)

[3]Increased DNA Methylation and Decreased Expression of PDX-1 in Pancreatic Islets from Patients with Type 2 Diabetes[J].Molecular Endocrinology.2012(7)

[4]Directed Differentiation of Embryonic Stem Cells Allows Exploration of Novel Transcription Factor Genes for Pancreas Development[J].Jing Sui,Munish Mehta,Bingyin Shi,Grant Morahan,Fang-Xu Jiang.Stem Cell Reviews and Reports.2012(3)

[5]许晓婷.兔骨髓间充质干细胞培养、冻存及体外分化为胰岛β细胞的研究[D].河南农业大学,2014.