Vimentin的纯化方法和应用

背景及概述^[1]

Vimentin(波形蛋白，Vim)为极度保守的细胞骨架Ⅲ型中间丝蛋白，主要表达于中胚层起源的间充质细胞中，以多聚体纤维稳定存在。Vim单体仅溶于高离子序列溶液如尿素、阴离子表面活性剂、盐酸胍溶液等，分子量为53kDa，等电点5.05，在pH值7.2-7.4最稳定。Vim具有调节细胞分化、迁移、信号传导、凋亡以及自身抗原和细胞因子特性，在感染、肿瘤、自身免疫、固有免疫等方面显现复杂的功能，具有生物药品开发的广阔前景。

纯化方法^[1]

(1)粗提：解剖猪眼取晶状体，浸入粗提液后匀浆制得混悬液；将混悬液离心后弃上清液，取沉淀物重悬数次并离心；取沉淀物冻干制得粗提粉；

(2)精提：以精提液溶解步骤(1)中的粗提粉，离心后去沉淀，取上清液浓缩后得到精提物溶液；

(3)分离：取精提物溶液加载到预平衡的DEAESepharoseFF柱(二乙胺基乙基键合快流速琼脂糖凝胶弱阴离子交换柱)，先使用缓冲液洗脱大部分的42kDa杂蛋白，再使用第二缓冲液进行线性洗脱，收集馏分；

(4)纯化：对各馏分用10％SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶)电泳，做Western-Blot(免疫印迹法)实验进行蛋白成分检测；合并53kDa目标波形蛋白含量达80％以上的馏分，经透析、冻干即得纯化Vimentin粉。

应用^[1]

CN201610675178.5报道了肺纤维化的尿液蛋白标志物及其在诊断和预后中的用途。具体而言，本发明涉及利用肺纤维化疾病模型和质谱分析获得的尿蛋白标志物在人肺纤维化疾病早期诊断、病程监测及疗效评估中的用途，所述尿蛋白标志物包括胶原α-1(I)链、Vimentin、蛋白质RUFY3、角蛋白II型骨架8、钠氢交换监管辅因子NHE-RF2、苏氨酸合酶样2、锌肌动蛋白结合重复蛋白2、低密度脂蛋白受体相关蛋白4、鸟嘌呤核苷酸结合蛋白亚基的α-11、原肌球蛋白的α-3链、线粒体型应力-70蛋白、NSFL1辅因子P47、泛素羧基末端水解酶同工酶L1等。

参考文献

[1][中国发明]CN201610038575.1一种提取纯化波形蛋白的方法

[2]CN201610675178.5肺纤维化的尿液蛋白标志物及其在诊断和预后中的用途