TBX培养基的应用

背景^[1-3]

TBX培养基是改良的培养基，用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中大肠杆菌的快速检测。用于快速、准确检测大肠杆菌，培养24小时，大肠杆菌显蓝绿色，大肠菌群显无色，其它菌显黄色或无色，革兰氏阳性菌被抑制。

用法

称取本品33.6 g加入1000ml蒸馏水，加热溶解并不停搅拌，煮沸不要超过1分钟。分装三角瓶，121℃高压灭菌15分钟。取1ml制备好的样品液加入直径为9cm无菌平皿中心，倾入冷却至45-50℃培养基约15ml，混匀，凝固后，36±1℃倒置培养18～24h。

或冷却至45-50℃时，倾入无菌平皿，琼脂完全凝固后，在37℃的培养箱中倒置放置1-2小时，加入适当稀释度的样品液1ml，涂布于培养基上，36±1℃培养18～24h。

操作步骤

1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液

2、取样品液1ml加入冷却至45-50℃显色培养基中混匀或涂布于平板上

3、36±1℃培养18～24h，选用有30～200个菌落的平板，计数平板上出现的典型大肠杆菌菌落。大肠杆菌典型菌落为蓝绿色，其它细菌为无色或黄色菌落。

总大肠杆菌=蓝绿色菌落

4、对可疑大肠杆菌菌落可划线接种到营养琼脂平板上，36±1℃培养12-16小时。

应用^[4][5]

用于鸡源大肠杆菌的分离鉴定及四环素类耐药基因检测研究

大肠杆菌病的流行和传播给养殖业带来重大损失，鸡大肠杆菌病主要表现为大肠杆菌性败血症、肝周炎、心包炎及卵黄性腹膜炎等，大肠杆菌还可以通过污染鸡蛋、蛋制以及耐药性的传播进而威胁人类健康，因此，开展鸡源大肠杆菌相关研究具有重要的经济学和公共卫生学意义。

本研究以分离自陕西部分规模化养殖场的158株鸡源大肠杆菌为对象，研究其对四环素类药物的耐药性以及相关耐药基因携带情况，并尝试探讨耐药性与耐药基因之间的相关性，为进一步阐明大肠杆菌耐药性产生的机制，以及临床疾病防控提供理论支持。

1. 无菌法采取陕西部分规模化养鸡场的病、死鸡肝脏样本，分别接种麦康凯琼脂和伊红美兰琼脂，挑取典型单菌落纯化培养，对疑似大肠杆菌进行生化鉴定及血清型鉴定。结果显示，从450份肝脏样本中共分离鉴定大肠杆菌菌株158株，优势血清型为O78和O38。

2. 参照CLSI(clinical and laboratory standards institute)推荐的K-B药敏纸片法对158株鸡源大肠杆菌进行4种四环素类药物的敏感性试验。

结果显示，鸡源致病性E.coli分离株对四环素、氯四环素、氧四环素以及多西环素的耐药率分别为88.6%、77.2%、87.3%、50.6%，158株大肠杆菌中多重耐药菌株高达78.5%

参考文献

[1]Diversity of antimicrobial resistance genes and class-1-integrons in phylogenetically related porcine and human Escherichia coli[J].Veterinary Microbiology.2012(3-4)

[2]Distribution and transferability of tetracycline resistance determinants in Escherichia coli isolated from meat and meat products[J].Hyon-Ji Koo,Gun-Jo Woo.International Journal of Food Microbiology.2011(2)

[3]Characterization of antimicrobial resistance and molecular determinants of beta-lactamase in Escherichia coli isolated from chickens in China during 1970–2007[J].Lin Li,Zhi-Gang Jiang,Li-Ning Xia,Jian-Zhong Shen,Lei Dai,Yang Wang,Si-Yang Huang,Cong-Ming Wu.Veterinary Microbiology.2010(3)

[4]Escherichia coli of poultry food origin as reservoir of sulphonamide resistance genes and integrons[J].Leila Soufi,Yolanda Sáenz,Laura Vinué,Mohamed Salah Abbassi,Elena Ruiz,Myriam Zarazaga,Assia Ben Hassen,Salah Hammami,Carmen Torres.International Journal of Food Microbiology.2010(3)

[5]牛建宁.鸡源大肠杆菌的分离鉴定及四环素类耐药基因检测研究[D].西北农林科技大学,2014.