B16细胞的应用

背景^[1-3]

B16细胞（小鼠黑色素瘤细胞）是指恶性黑色素瘤，是黑色素细胞来源的一种高度恶性的肿瘤，简称恶黑，多发生于皮肤，也可见于黏膜和内脏，约占全部肿瘤的3%。是由异常黑素细胞过度增生引发的，恶性程度极高，占皮肤肿瘤死亡病例的极大部分。

黑色素瘤病变多发生于真皮和表皮交界处，瘤细胞类似痣细胞，但明显异型，细胞间质和细胞内充满黑色素，根据细胞形态和黑色素量的不一，可分5型：

1、大上皮样细胞多见，细胞呈多边形。

2、小上皮样细胞核大而不典型。

3、梭形细胞胞质呈原纤维样，核大染色深。

4、畸形细胞为单核或多核。

5、树枝突细胞比正常黑色素细胞大，胞核异型，瘤细胞对酪酶呈强阳性反应，含黑色素少时，在HE切片内难以证实，故有“无黑色素性黑色素瘤”之称，但若用银染色，在少数细胞内仍可检出黑色素。

黑色素细胞是一种皮肤里的特殊的细胞，它产生黑色素，传递给周围的角质形成细胞。黑色素停留在这些角质形成细胞的细胞核上起保护作用，防止染色体受到光线辐射受损。黑色素细胞能合成并分泌黑色素，因此是一种腺细胞。然而黑色素的生物合成非常复杂，是通过色体（未成熟的黑色素）内酪氨酸—酪氨酸酶反应形成的。

应用^[4][5]

用于孜然提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用及对B16黑色素瘤细胞内黑色素生成的影响研究

以孜然为原料,优化了孜然提取物抑制酪氨酸酶活性的提取工艺,测定了孜然提取物中主要活性成分的含量,研究了孜然提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用及对小鼠B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的影响,并考察了孜然提取物不同极性部位抗氧化活性及对酪氨酸酶活性的抑制效果,以期为孜然作为天然的美白材料应用于化妆品行业提供理论依据。

主要研究结果如下:1.从乙醇、丙酮和水三种溶剂中筛选得到乙醇是孜然抑制酪氨酸酶活性成分的提取溶剂。在单因素实验结果的基础上结合响应面设计,优化得到孜然提取物抑制酪氨酸酶活性的提取工艺参数:乙醇体积分数71%,液料比16:1（m L/g）,提取时间2.2h,提取温度83℃,此优化条件下得到的孜然提取物对酪氨酸酶活性抑制率达（42.61±0.56）%,与预测值接近。

2. 采用Folin-Ciocalteu比色法测定多酚含量,Na NO2-Al（NO3）3-Na OH比色法测定黄酮含量,香草醛比色法测定皂苷含量,苯酚-硫酸比色法测定多糖含量,结果表明孜然提取物中多酚、黄酮、皂苷、多糖的含量分别为（1.35±0.03）%、（4.40±0.29）%、（0.76±0.04）%、（4.89±0.28）%。

3.孜然提取物对酪氨酸酶活性抑制作用的研究结果表明,孜然提取物对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性都具有明显的抑制效果,均呈浓度依赖关系,IC50分别为1.027mg/m L和0.977mg/m L;孜然提取物能延长酪氨酸酶催化氧化L-酪氨酸的迟滞时间,迟滞时间与孜然提取物浓度呈正相关;孜然提取物抑制酪氨酸酶二酚酶活性的动力学研究结果表明,其抑制类型属于可逆混合型,抑制常数KI为0.62mg/m L。

参考文献

[1]Agro-morphological and phytochemical diversity of Iranian Cuminum cyminum accessions[J].Mohammad Moghaddam,Abdollah Ghasemi Pirbalouti.Industrial Crops&Products.2017

[2]Chaetocin inhibits IBMX-induced melanogenesis in B16F10 mouse melanoma cells through activation of ERK[J].Jung-Soo Bae,Mira Han,Cheng Yao,Jin Ho Chung.Chemico-Biological Interactions.2016

[3]Chemical Composition and Antioxidant Activity Cuminum cyminum L.Essential Oils[J].Ali Reza Ladan Moghadam.International Journal of Food Properties.2016(2)

[4]Isolation,purification,and antioxidant activities of degraded polysaccharides from Enteromorpha prolifera[J].Jie Xu,Li-Li Xu,Qin-Wei Zhou,Shu-Xian Hao,Tao Zhou,Hu-Jun Xie.International Journal of Biological Macromolecule.2015

[5]杜国英.孜然提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用及对B16黑色素瘤细胞内黑色素生成的影响[D].兰州理工大学,2018.