成人骨髓间充质干细胞完全培养基的应用

背景^[1-3]

成人间质干细胞完全培养基可用于成人间质干细胞的原代及传代培养，能有效维持骨髓间质干细胞的生长能力；能有效维持骨髓间质干细胞多向分化能力。

培养基成分：

成人骨髓间质干细胞基础培养基440 mL；成人骨髓间质干细胞专用胎牛血清50 mL；双抗5 mL；谷氨酰胺5 mL。

骨髓原始间充质干细胞是骨髓基质干细胞，是人们在哺乳动物的骨髓基质中发现的一种具有分化形成骨、软骨、脂肪、神经及成肌细胞的多种分化潜能的细胞亚群。它们对骨髓中的造血干细胞（HSC）不仅有机械支持作用，还能分泌多种生长因子（如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等）来支持造血。

常用的分离MSC的方法主要有全骨髓法和密度梯度离心法，全骨髓法即根据干细胞在低血清培养基中有贴壁优势特性，定期换液除去不贴壁细胞，从而达到纯化及扩增MSC的目的。密度梯度离心法即根据骨髓中各细胞成分比重的不同，分离单核细胞进行贴壁培养。

二者本质上无多大区别。随着对MSC表面抗原认识的深入，又有人利用免疫方法如流式细胞仪法、免疫磁珠法等对其进行分离纯化。但经过流式或磁珠分选后的细胞出现了增殖缓慢等一些问题，加之成本较高和技术的难度，在某种程度上限制了这些方法的广泛应用。

应用^[4][5]

用于FGF-2和BMP-2诱导低密度人骨髓间充质干细胞（hMSCs）成骨分化的协调机制研究

通过体外实验检测FGF-2和BMP-2单独、联合作用对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)增殖效应的效应。

方法：采用CyQUANT Cell Proliferation Assay检测法,检测不同浓度FGF-2和BMP-2单独、联合应用3天后hMSCs增殖的状况,并进行统计学分析。

结果：FGF-2能显著地均促进hMSCs的增殖,并呈剂量依赖性,当达到20ng/mL时促增殖能力最强,而之后加大浓度促增殖能力减弱。相反的,BMP-2呈现出阶段性的抑制增殖作用,低浓度(0.1-1.0ng/mL)时,BMP-2对细胞增殖的促进或抑制作用均不明显,高浓度(10-200ng/mL)时能抑制细胞增殖,且抑制效果与剂量有关。

结论：不同生长因子的不同处理方式对hMSCs增殖的效应不同。联合使用FGF-2和BMP-2时,细胞增殖能力下降,BMP-2影响FGF-2促细胞增殖能力。

检测FGF-2和BMP-2单独、联合作用对人hMSCs分化的效应。

方法：通过定量生化比色法测定不同样品BMP-2、FGF-2、FGF-2/BMP-2处理按6孔培养板最低细胞密度接种培养的细胞后的碱性磷酸酶(ALP)时间曲线以检测生长因子(GFs)对ALP活性的影响。应用分光光度法检测单独、联合施加BMP-2和FGF-2后,hMSCs细胞外基质钙含量水平以反映对细胞分化作用的影响,并进行统计学分析。

结果：BMP-2能在较长时间内明显提高细胞ALP活性水平及促进钙的沉积,而FGF-2则起到抑制作用。BMP-2单独作用成骨效应明显高于FGF-2或两种生长因子联合作用。

结论：不同生长因子的不同处理方式对hMSCs分化的效应不同。FGF-2和BMP-2联合应用会抑制BMP-2的促成骨分化能力。

参考文献

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[2]Dexamethasone-loaded hydroxyapatite enhances bone regeneration in rat calvarial defects[J].Reza Tavakoli-darestani,Alireza Manafi-rasi,Amin Kamrani-rad.Molecular Biology Reports.2014(1)

[3]A comparison of tissue-engineered bone from adipose-derived stem cell with autogenous bone repair in maxillary alveolar cleft model in dogs[J].N.Pourebrahim,B.Hashemibeni,S.Shahnaseri,N.Torabinia,B.Mousavi,S.Adibi,F.Heidari,M.Jafary Alavi.International Journal of Oral&Maxillofacial Surgery.2012

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[5]雷蕾.FGF-2和BMP-2诱导低密度人骨髓间充质干细胞（hMSCs）成骨分化的协调机制研究[D].中南大学,2014.