平滑肌细胞培养基SMCM的应用举例

背景及概述^[1]

平滑肌细胞培养基SMCM是专门为正常人类平滑肌细胞体外培养设计的最适于其生长的培养基，是经灭菌的液体培养基，包含必需和非必需氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质和低浓度胎牛血清(2%)。平滑肌细胞培养基SMCM缓冲体系为重碳酸盐，在含5%CO₂的细胞培养箱中平衡后pH值为7.4。平滑肌细胞培养基SMCM的配方能够选择性的促进正常人类微血管内皮细胞体外培养中的增殖和生长，并为其达到最理想营养平衡状态。

应用^[1]

平滑肌细胞培养基SMCM可用于平滑肌细胞增殖实验：以25cm²(50ml)一次性培养瓶培养细胞，细胞在经过消化传代后明显较原代胖大，细胞可自行沿一定方向生长，表现为峰谷样图案。平滑肌细胞随着传代次数增多，体积会逐渐增大，突触明显并逐渐丧失梭形结构，当细胞生长密集时，拥挤的细胞逐层环绕，中心可隆起呈结节状。将酶消化法获得的细胞传代至第3代，分别以专业平滑肌细胞培养基SMCM或含10％新生牛血清的DMEM/F12培养基(10％-F12)进行培养，及时记录细胞生长情况。以每孔2000个细胞为标准将第3代平滑肌细胞接种于96孔板内，每个样本需重复3～4个辅助测量孔。将96孔板静置于细胞培养箱内，6小时后观察细胞贴壁、舒展。以每100μl培养基加10μlCCK-8试剂的比例配置混悬剂。清除各待测孔培养基后，每孔加入混悬剂100μl。将96孔板静置于培养箱内2h后取出，置于微孔板振荡器上震荡1min，将96孔板转至酶标仪，在450nm波长下读取各孔数据并记录。测量吸光值后的孔不再重复使用。每24h测量一次实验孔吸光值，连续测量9天(216h)。结果平滑肌细胞在SMCS中可表现出典型的细胞增殖S型曲线，但在10％-F12中增殖缓慢甚至近乎停滞。

参考文献

[1]CN201810075925.0一种食管胃结合部平滑肌细胞的酶消化法原代培养及鉴定方法