大鼠星形胶质细胞条件培养基-无血清RACM-SF的应用

背景^[1-3]

大鼠星形胶质细胞条件培养基-无血清RACM-SF是用无血清的星形胶质细胞培养基从原代培养的大鼠星形胶质细胞中制备的液体培养基。培养基经过无菌过滤，在5%CO2/95%空气的培养箱中平衡时，其pH值为7.4。无血清星形胶质细胞条件培养基（ACM-sf）已广泛应用于培养神经元和内皮细胞。ACM也被证明可以保护神经元免受皮质酮诱导的损伤。

星形胶质细胞是中枢神经系统中含量最丰富的细胞。星形胶质细胞具有多种生物学功能，如支持参与血脑屏障形成的内皮细胞，为神经元提供营养，维持细胞外离子平衡，促进中枢神经系统的修复。

星形胶质细胞具有许多突起，伸展充填在神经细胞的胞体及其突起之间，起支持和分隔神经细胞的作用，并参与了血脑屏障的形成。由于星形胶质细胞能产生和分泌某些神经递质以及表达某些神经递质受体，可对一些神经活性物质产生反应。另外，星形胶质细胞能对外源性化合物进行生物转化，并可帮助调节神经元周围的离子微环境。

外源性化学物质或外伤损伤中枢神经系统后，损伤区域星形胶质细胞通过增生可形成胶质“瘢痕”。这种增殖多伴随着胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）的表达增加。因此组织中GFAP升高是中枢神经系统对损伤作出反应的一个标志性信号。

应用^[4][5]

用于糖氧剥夺/复氧复糖下大鼠星形胶质细胞Cx43的变化及其机制研究

观察大鼠星形胶质细胞Cx43在糖氧剥夺/复氧复糖（ischemia/reperfusion;oxygen-glucose deprivation/reoxygenation;I/R）条件下数量和质量方面的变化规律，并进一步探讨其变化的机制。

方法：采用连续传代法体外纯化培养大鼠星形胶质细胞，通过调节培养箱参数及更换无糖培养液建立其I/R模型。糖氧剥夺2h后，分别复氧复糖0.5h、1h、3h、6h、12h、24h、72h，采用Western blotting方法对Cx43进行定量分析，通过Western blotting及RT-PCR方法分析EB1在蛋白和基因表达量方面的变化。

使用MTT比色法选择细胞损伤最重的时间点，设立正常培养组、I/R Saline对照组、I/R甘珀酸干预组，采用激光共聚焦显微镜观察Cx43分布的变化；dynasore阻断胞吞作用后，再次于激光共聚焦显微镜下观察Cx43的分布变化。

同时，设立正常培养组、I/R组、I/R TPA组、I/R MG132组、I/R TPA+MG132组，采用Westernblotting方法对p-Cx43（Ser368）、p-ERK1/2、Beclin1蛋白进行定量分析。

结果：(1)成功建立了星形胶质细胞纯化体系及其糖氧剥夺/复氧复糖模型。

（2）Western blotting结果提示I/R后各个时间点的Cx43总量并未发生改变（P>0.05）。

（3）MTT法提示I/R后6h细胞受到的损伤最严重，此时使用激光共聚焦显微镜观察发现Cx43发生了内在化，即细胞膜上分布减少，而细胞质内分布增多(P<0.05)。

参考文献

[1]Autophagy and gap junctional intercellular communication inhibition are involved in cadmium-induced apoptosis in rat liver cells[J].Hui Zou,Liling Zhuo,Tao Han,Di Hu,Xiaokang Yang,Yi Wang,Yan Yuan,Jianhong Gu,Jianchun Bian,Xuezhong Liu,Zongping Liu.Biochemical and Biophysical Research Communicatio.2015(4)

[2]Eribulin disrupts EB1-microtubule plus-tip complex formation[J].Brian O’Rourke,Chia-Ping Huang Yang,David Sharp,Susan Band Horwitz.Cell Cycle.2014(20)

[3]The dual face of connexin-based astroglial Ca 2<ce:hsp sp="0.10"/>+communication:A key player in brain physiology and a prime target in pathology[J].Marijke De Bock,Elke Decrock,Nan Wang,Mélissa Bol,Mathieu Vinken,Geert Bultynck,Luc Leybaert.BBA-Molecular Cell Research.2014

[4]“Ciliophagy”[J].Suzanne M Cloonan,Hilaire C Lam,Stefan W Ryter,Augustine M Choi.Autophagy.2014(3)

[5]谢红燕.糖氧剥夺/复氧复糖下大鼠星形胶质细胞Cx43的变化及其机制[D].吉林大学,2015.