卫矛醇半固体发酵管的应用

背景^[1-3]

卫矛醇半固体发酵管用于肠出血性大肠杆菌卫予醇发酵试验。

卫矛醇也称甜醇、半乳糖醇、卫矛醇、己六醇；分子量：182.17，属于生化试剂,主要用于细菌鉴别，卫矛醇是微生物研究防病治病必不可少的重要糖类,具有对O157大肠杆菌的特殊发酵性，可用来检测高致病性的O157大肠杆菌类型，已成为行业的标准检测方法。

肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic E.coli,EHEC）是大肠杆菌的一个亚型，以O抗原分型，EHEC可分为O157、O26、O111血清型，主要致病菌株为O157:H7，可引起感染性腹泻，因能引起人类的出血性肠炎而得名。

EHEC-O157H7为革兰氏染色阴性的、有动力、两端钝圆的短杆菌。没有芽孢、有周鞭毛，大多数菌株有荚膜。它对热敏感，最适生长温度为37℃，30-42℃时在肉汤中也生长良好，55℃经60分钟可有部分存活，在75℃水中1分钟可被杀死。迟缓发酵山梨醇-麦康凯(SMAC)培养基可作为对O157∶H7之筛选培养基。在SMAC培养基上，O157∶H7菌落无色而发酵菌株呈粉红色，但有半数EPEC菌株有类似O157∶H7之特性应注意EPEC与EHEC之鉴别。大肠埃希杆菌O157∶H7抵抗力较强，耐酸耐低温。

生化反应可采用山梨醇发酵试验、葡萄糖醛酸酶试验、棉子糖发酵试验、卫矛醇发酵试验、鸟氨酸和赖氨酸试验进行初筛，然后用O157H7抗血清玻片凝集试验进行鉴定。

应用^[4][5]

用于禽源大肠杆菌的分离鉴定及iucB基因缺失菌株的构建研究

大肠杆菌是一类常见的人畜共患病病原菌。临床上分为肠内致病菌、肠外致病菌和共生菌三类。对于禽类而言,大肠杆菌可作为肠道内正常菌群存在,或存在于宿主粘膜表面。只有那些具有特定毒力特征且引起发病的菌株被认定为禽致病性大肠杆菌,它是家禽最常见的病原菌之一。

对武汉周边8个地区鸡大肠杆菌进行分离鉴定,通过血清分型、耐药表型、群系鉴定及毒力因子分析确定优势血清型的强毒菌株ACN003,并缺失其毒力基因iucB。

鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定及耐药性等特性的研究1. 自发病鸡中分离得到45株细菌。经糖发酵试验、IMVIC试验等生化试验及培养特性观察,证实获得的45株细菌为大肠杆菌。生化试验表明：45株菌均能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蜜二糖、山梨醇、甘露醇,不分解肌醇、纤维二糖、阿拉伯醇,部分菌株可分解卫矛醇、山梨糖、棉子糖、鼠李糖、蔗糖等。所有分得的菌株均不能利用枸橼酸盐,吲哚试验阳性,MR试验阳性,VP试验阴性,即IMViC为“++--”。

2.分离菌株毒力基因的扩增鉴定：选择5个致病菌株的保守基因(papC,tsh,iucD,iss,irp2)进行PCR扩增,结果表明45株菌中iss检出率高达82.22%,iucD的检出率为68.89%,irp2的检出率为28.89%,tsh的检出率为26.67%,papC的检出率为4.44%。

3. 用大肠杆菌单因子血清进行血清型鉴定,分得菌株中有21株鉴定出了血清型,占分离菌株总数的46.67%。在可分型的菌株中鉴定出8种不同的血清群,包括078、02、04、O11、020、018、038、0128。其中078为本次分得菌株的优势血清型,共有7株,占测出血清型菌株总数的33.3%。4.PCR扩增chuA、yjaA、TspE4C2,判定分离菌株所属群系。

分离菌株以B1群居多,共有36株,占分得菌株的80%,其次为D群,共有8株,占分得菌株的17.78%,A群的共有1株,占分得菌株的2.22%。

参考文献

[1]Avian pathogenic,uropathogenic,and newborn meningitis-causing Escherichia coli:How closely related are they?[J].International Journal of Medical Microbiology.2007(3)

[2]Complement Resistance,as Determined by Viable Count and Flow Cytometric Methods,and Its Association with the Presence of iss and the Virulence of Avian Escherichia coli[J].Lisa K.Nolan,Catherine W.Giddings,Shelley M.Horne,Curt Doetkott,Penelope S.Gibbs,Richard E.Wooley,Steven L.Foley.Avian Diseases.2002(2)

[3]Serotypes of Escherichia coli isolated from septicaemic chickens in Galicia(Northwest Spain)[J].Veterinary Microbiology.1998(3)

[4]The Occurrence of Ambient Temperature-Regulated Adhesins,Curli,and the Temperature-Sensitive Hemagglutinin Tsh among Avian Escherichia coli[J].Avian Diseases.1998(1)

[5]张瑞轩.禽源大肠杆菌的分离鉴定及iucB基因缺失菌株的构建[D].华中农业大学,2013.