胆盐乳糖培养基(BL)的应用

背景^[1-3]

胆盐乳糖培养基(BL)用途:用于药品和生物制品中大肠杆菌,沙门氏菌和绿脓杆菌的增菌培养。

原理：

胨提供碳氮源；乳糖是可发酵的糖类；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钠和磷酸二氢钾为缓冲剂；牛胆盐和去氧胆酸钠为选择性抑菌剂。

成分(g/L)：蛋白胨20.0；乳糖5.0；牛胆盐2.0；氯化钠5.0；磷酸氢二钾4.0；磷酸二氢钾1.3

pH值7.4±0.2 25℃

使用方法：

1、称取本品35.8g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，每瓶100mL，121℃20min，待冷至常温后，备用。

2、样品的处理。

3、取胆盐乳糖增菌液3份，2份分别加入规定量的供试液，其中一份加入对照菌50～100个作阳性对照，第三份加入与供试液等量的稀释液作阴性对照。

4、将三角瓶放入30～35℃恒温培养箱内培养18～24h。必要时可延长至48h。

5、观察结果。阳性对照应生长良好，阴性对照应无菌生长。

应用^[4][5]

用于乳品中大肠菌群快速检测研究

以国标法中乳糖胆盐发酵培养基为基本营养成分,分别研究构建了检测片法和细胞培养瓶剂法,并对模拟条件下的可逆性损伤大肠杆菌进行了复苏实验研究。为探索适合乳品中大肠菌群快速检测的方法和提高检出率打下研究基础。

(1) 建立了乳品中大肠菌群检测片快速检测方法,以国标法中的乳糖发酵管培养基为基本营养成分,遴选、优化、添加辅助营养成分、酸碱指示剂、显色剂、缓冲剂、修复剂、选择性抑菌剂,通过冷水凝胶剂等均匀固化于基片上。样品滴加检测片上,培养16～18 h即可直接依据检测片颜色的变化定量检样中大肠菌群的含量,结果既可用cfu/mL报告,也可以MPN形式报告。

优化后的(a)鲜乳检测片配方(g.L-1)：胰蛋白胨10.0,大豆蛋白胨5.0,乳糖15.0,SDS 0.1,磷酸氢二钾4.0,氯化钠3.0,聚丙烯酸钠1.0,质量浓度为2%的TTC溶液5 mL,质量浓度为1.6g/100mL溴甲酚紫溶液4 mL,蒸馏水1000 mL；(b)酸乳检测片配方(g.L-1)：胰蛋白胨10.0,大豆蛋白胨5.0,乳糖15.0,SDS 0.1,磷酸氢二钾20.0,氯化钠3.0,聚丙烯酸钠1.0,质量分数为2%的TTC溶液5 mL,质量浓度为1.6 g/100mL溴甲酚紫溶液4 mL,蒸馏水1000 mL。

检测片对标准大肠杆菌等7株菌株和市售乳制品样本进行测试,结果表明,检测片上的红色菌落清晰明显,菌落周围黄晕颜色深浅适宜,检测结果重复性强,灵敏度高,最低检出限为0～4cfu/mL,报告结果可在18 h内完成。

实际使用检测片法和国标法对鲜乳、酸乳、奶粉各20份样本进行大肠菌群检测,两方法所测结果的总符合率为96.7%,检测结果经χ2检验,χ2=0.5<χ20.05(1),P>0.05,表明两方法检出的阳性率在统计学上无显著性差异。

(2) 研究了一种用于快速检测大肠菌群的细胞培养瓶剂法,即以国标法中的乳糖胆盐发酵培养基为营养成分,经浓缩、干燥后制成快速检测瓶剂,以遴选的3.5 mol/LNaOH配制的百里香酚酞溶液作为产气指示剂,并将其制成1×1cm规格产气指示试纸。

样品滴加细胞培养瓶内,培养24 h,依据培养瓶盖上产气指示试纸颜色变化及瓶内溶液颜色变化,确定可疑阳性样品,并对其进行氧化酶实验及镜检,验证大肠菌群的存在性。

实验对细胞培养瓶法进行了大肠菌群的重复性及实际样品检测,并与国标法进行了比较,结果显示,细胞培养瓶法与国标法所测结果符合率达96%,样品检测报告时间只需24 h,两种方法所测结果在统计学上无显著性差异(P>0.05)。

参考文献

[1]Enzymatic substrates in microbiology[J].Sylvain Orenga,Arthur L.James,Mohammed Manafi,John D.Perry,David H.Pincus.Journal of Microbiological Methods.2009(2)

[2]Analytical limits of fourβ-glucuronidase andβ-galactosidase-based commercial culture methods used to detect Escherichia coli and total coliforms[J].Journal of Microbiological Methods.2008(3)

[3]A simple bioluminescence procedure for early warning detection of coliform bacteria in drinking water[J].World Journal of Microbiology and Biotechnology.2008(10)

[4]Growth and survival of Escherichia coli O157:H7 during the manufacture and ripening of raw goat milk lactic cheeses[J].C.Vernozy-Rozand,C.Mazuy-Cruchaudet,C.Bavai,M.P.Montet,V.Bonin,A.Dernburg,Y.Richard.International Journal of Food Microbiology.2005(1)

[5]魏斌.乳品中大肠菌群快速检测研究[D].南昌大学,2011.