IEC-6大鼠小肠隐窝上皮细胞的应用

背景^[1-3]

IEC-6大鼠小肠隐窝上皮细胞采用先机械分离后胶原酶-胰蛋白酶联合消化法、并通过专用培养基培养筛选制备而来；细胞纯度可达90%以上、而且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌酵母、和真菌等。

小鼠小肠隐窝上皮细胞分离自小肠组织；小肠位于腹中，上端接幽门与胃相通，下端通过阑门与大肠相连，是食物消化吸收的主要场所。小肠盘曲于腹腔内，上连胃幽门，下接盲肠，分为十二指肠、空肠和回肠三部分。小肠内消化是至关重要的，因为食物经过小肠内胰液、胆汁和小肠液的化学性消化及小肠运动的机城性消化后，基本上完成了消化过程，同时宫养物质被小肠粘膜吸收了。

小肠管壁由粘膜、粘膜下层、肌层和浆膜构成。其结构特点是管壁有环形皱襞，粘膜有许多绒毛，绒毛根部的上皮下陷至固有层，形成管状的肠腺，其开口位于绒毛根部之间。绒毛和肠腺与小肠的消化和吸收功能关系密切；构成肠腺的细胞有柱状细胞、杯状细胞、潘氏细胞和未分化细胞。柱状细胞和内分泌细胞与绒毛上皮相似，接近绒毛的柱状细胞与吸收细胞相似，绒毛深部的柱状细胞微绒毛少而短，不形成纹状缘。

小肠有三种功能即消化、吸收和分泌及运动功能，其中以吸收和分泌功能为主。小肠腔面的环行皱襞从幽门附近开始出现，在十二指肠末段和空肠头段极发达，向下逐渐减少和变矮，至肠中段以下基本消失。粘膜表面还有许多细小的肠绒毛，是由上皮和固有层向肠腔突起而成，形状不—，以十二指肠和空肠头段发达。绒毛千十二指肠呈叶状，于空肠呈指状，于回肠则细而短。环行皱襞和绒毛使小肠表面积扩大20-30倍，绒毛根部的上皮下隐至固有层形成管状的小肠腺，又称肠隐窝，故小肠腺与绒毛的上皮是连续的，小肠腺直接开口于肠腔。

应用^[4][5]

用于醋制降低京大戟对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6毒性研究

比较京大戟醋制前后对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6的毒性差异,初步探讨京大戟醋制减毒机制。

方法:以大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6为研究对象,采用MTT法检测京大戟醋制前后对IEC-6细胞活性的影响,采用倒置显微镜观察醋制前后对细胞形态的影响;采用高内涵细胞成像系统(HCS)分析醋制降低肠细胞线粒体凋亡通路。

结果:与阴性对照组比较,增殖抑制实验显示京大戟生品具有较强的肠细胞毒性(P<0.01),HCS分析结果显示京大戟可显著降低细胞核Hoechst荧光强度、线粒体膜电位荧光强度(P<0.05,P<0.01),并显著增加Annexin V-FITC和PI荧光强度、细胞膜通透性荧光强度(P<0.01,P<0.01,P<0.01);

醋制后与京大戟生品各剂量组比较,京大戟醋品可显著降低京大戟生品对肠细胞的增殖抑制作用,增加细胞核Hoechst荧光强度、线粒体膜电位荧光强度(P<0.05,P<0.05),降低Annexin V-FITC和PI荧光强度、细胞膜通透性荧光强度(P<0.01,P<0.01,P<0.05),且呈一定的剂量相关性。

结论:醋制可降低京大戟对肠细胞的毒性,其可能机制为通过降低京大戟对IEC-6细胞膜通透性,从而为进一步阐明京大戟醋制减毒机制提供了一定的依据。

参考文献

[1]A high content screening assay for identifying lysosomotropic compounds[J].Sashi Nadanaciva,Shuyan Lu,David F.Gebhard,Bart A.Jessen,William D.Pennie,Yvonne Will.Toxicology in Vitro.2010(3)

[2]A new cytotoxic casbane diterpene from Euphorbia pekinensis[J].Qiao-Li Liang,Chuan-Chao Dai,Ji-Hong Jiang,Yu-Ping Tang,Jin-Ao Duan.Fitoterapia.2009(8)

[3]Cytotoxic Diterpenoids from Euphorbia pekinensis[J].Ling-Yi Kong,Yi Li,Xian-Li Wu,Zhi-Da Min.Planta Med.2002(03)

[4]Rapid colorimetric assay for celluar growth and survival:application to proliferation and cytotoxicity assays.Mosmann T,et al.Journal of Immunological Methods.1983

[5]曹雨诞,颜晓静,张丽,丁安伟.醋制降低京大戟对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6毒性研究[J].中国中药杂志,2014,39(06):1069-1074.