(GAMMAS,4S)-4-羧基-GAMMA-[[芴甲氧羰基]氨基]-2,2-二甲基-DELTA-氧代-3-恶唑烷戊酸叔丁酯的应用

发布日期:2020/9/15 13:27:50

背景及概述^[1]

(GAMMAS,4S)-4-羧基-GAMMA-[[芴甲氧羰基]氨基]-2,2-二甲基-DELTA-氧代-3-恶唑烷戊酸叔丁酯简称Fmoc-Glu-Ser(Ψ，Me，Me pro)-OH，是一种假脯氨酸。有文献报道其可用于胰高血糖素类似物的合成。

应用^[1]

人前胰高血糖素原(preproglucagon)是158个氨基酸的前体多肽，其在组织中被差异性加工而形成多种结构上相关的胰高血糖素原衍生肽，包括胰高血糖素(Glu或GCG)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、胰高血糖素样肽-2(GLP-2)和胃泌酸调节素(OXM)。这些分子参与多种生理功能，包括葡萄糖内稳态、胰岛素分泌、胃排空和肠生长，以及食物摄取调节。

CN201380038909.X报道了一种胰高血糖素类似物。本发明化合物具有胰高血糖素激动剂活性。与天然胰高血糖素相比，本发明化合物具有提高的溶解度和/或稳定性。

在微波辅助合成仪中，使用DMF中的标准Fmoc策略在聚苯乙烯树脂(TentaGel SRam或Tentagel S PHB-Thr(tBu))上进行固相肽合成(SPPS)。使用HATU或COMU作为偶联剂，DIPEA作为碱。使用哌啶(DMF中20％)去保护。在适用的情况下使用假脯氨酸：Fmoc-Phe-Thr(ΨMe，Me pro)-OH、Fmoc-Asp-Ser(Ψ，Me，Me pro)-OH和Fmoc-Glu-Ser(Ψ，Me，Me pro)-OH(购自NovaBiochem)。

实施例如下：

在CEM Liberty肽合成仪上使用Tentagel S PHB-Thr(tBu)树脂(1.13g，0.24mmol/g)合成化合物7(SEQ ID NO：8)，其中使用COMU作为偶联剂，DMF作为溶剂，使用上述Fmoc化学进行。在序列中使用假脯氨酸Fmoc-Phe-Thr(ΨMe，Me pro)-OH(6/7位)和Fmoc-Glu-Ser(Ψ，Me，Me pro)-OH(15/16位)。

如上所述从树脂上切下肽，在Gemini-NX柱(5cm，C18，10微米)上利用流量为35ml/分钟的缓冲液A和缓冲液B的混合物进行纯化。产物用线性梯度的20-50％的缓冲液B洗脱47分钟，通过分析型HPLC和MS分析相关级分。将合并的级分冻干并且再溶解在水中，之后在Gemini-NX柱(2.12×25cm，C18(110A)；10微米)上利用流量为10ml/分钟的缓冲液A’和缓冲液B’的混合物进一步纯化。产物用线性梯度的5-40％的缓冲液B’洗脱47分钟，通过分析型HPLC和MS分析相关级分。向合并的级分中添加TFA，将其冻干得到112mg。通过分析型HPLC测定的纯度为99％，通过MS测定的单一同位素质量为3409.55Da(计算值为3409.58Da)。