ANTI-HUMAN TNF-ALPHA的应用

背景^[1-3]

ANTI-HUMAN TNF-ALPHA是以ANTI-HUMAN TNF-ALPHA为抗原的免疫蛋白，可以特异性结合HUMAN TNF-ALPHA，主要用于检测HUMAN TNF-ALPHA的Western blotting、Immunohistocry、ELISA、IF、IHC-P、IHC-F等生物实验。

TNF主要由活化的巨噬细胞，NK细胞及T淋巴细胞产生。1985年Shalaby把巨噬细胞产生的TNF命名为TNF-α，把T淋巴细胞产生的淋巴毒素（lymphotoxin，LT)命名为TNF-β。虽然TNF-α与TNF-β仅有约30%的同源性，但它们却拥有共同的受体。TNFα的生物学活性占TNF总活性的70%～95%，因此目前常说的TNF多指TNF-α。

人TNF-α前体由233个氨基酸组成（26 kDa），其中包含由76个氨基酸残基组成的信号肽，在TNF转化酶TACE的作用下，切除信号肽，形成成熟的157个氨基酸残基的TNF-α（17 kDa）。由于没有蛋氨酸残基，故不存在糖基化位点，其中第69位和101位两个半胱氨酸形成分子内二硫键。

人类TNF-α与小鼠TNF-α有79%氨基酸组成同源性，TNF-α的生物学作用似无明显的种属特异性。最近有人报道通过基因工程技术表达了N端少2个氨基酸（Val、Arg）的155氨基酸人TNF-α，具有更好的生物学活性和抗肿瘤效应。此外，还有用基因工程方法，将TNF-α分子氨基端7个氨基酸残基缺失，再将8Pro、9Ser和10Asp改为8Arg、9Lys和10Arg，或者再同时将157Leu改为157Phe，改构后的TNF-α比天然TNF体外杀伤L929细胞的活性增加1000倍左右，在体内肿瘤出血坏死效应也明显增加。TNF-α和β发挥生物学效应的天然形式是同源的三聚体。

应用^[4][5]

用于骨痹合剂对大鼠膝骨性关节炎模型IL-1β、TNF-α表达的影响及其颈椎退变的实验研究

观察骨痹合剂对该模型IL-1β和TNF-α表达的影响,同时探讨该模型大鼠颈椎退变的可能作用机制。

方法:选用怀孕15日龄的SD大鼠12只,分别置于不同的笼子中饲养,把出生第10天的40只幼鼠,按体重大小排序后随机分为四组,分别为空白对照组、生理盐水组、氨糖美辛组、骨痹合剂组,每组10只。四组均在腹腔麻醉下手术去除双前肢,手术后置于原母鼠饲养笼内继续饲养,再去除双前肢四个月后右膝关节行Hulth法手术。

骨痹合剂组按0.5m L/100g体重给予骨痹合剂灌胃;氨糖美辛组给予氨糖美辛肠溶片2mg/100g,置于同体积的蒸馏水中待其融化摇匀后,给予灌胃;生理盐水组按0.5ml/100g体重给予生理盐水灌胃;空白对照组不做任何干预,持续4周时间为干预过程。然后麻醉处死相对应的各组大鼠,取下右膝关节、颈椎通过固定、脱钙、脱水、包埋、切片、捞片、烤片,行HE染色、甲苯胺蓝染色、藏红固绿染色及IL-1β、TNF-α免疫组化检测。

结果:右膝关节HE染色、藏红固绿染色、甲苯胺蓝染色三种染色中空白对照组、生理盐水组较氨糖美辛组、骨痹合剂组的关节软骨表层欠光滑,部分关节表面出现了断裂和裂隙,软骨细胞分布不均匀且排序不整齐,软骨细胞各层次模糊,可见细胞簇集现象,潮线不完整,局部染色不均匀,关节软骨部分淡染失染。IL-1β和TNF-α免疫组化染色显示空白对照组和生理盐水组较氨糖美辛组、骨痹合剂组阳性细胞表达率高。

参考文献

[1]Abnormal human chondrocyte morphology is related to increased levels of cell‐associated IL‐1βand disruption to pericellular collagen type VI[J].Dianne H.Murray,Peter G.Bush,Ivan J.Brenkel,Andrew C.Hall.J.Orthop.Res..2010(11)

[2]Biological actions of curcumin on articular chondrocytes[J].Y.Henrotin,A.L.Clutterbuck,D.Allaway,E.M.Lodwig,P.Harris,M.Mathy-Hartert,M.Shakibaei,A.Mobasheri.Osteoarthritis and Cartilage.2009(2)

[3]Expression and Role of Connective Tissue Growth Factor in Painful Disc Fibrosis and Degeneration[J].Baogan Peng,Jindong Chen,Zhengda Kuang,Duanming Li,Xiaodong Pang,Xinyu Zhang.Spine.2009(5)

[4]Occurrence and Regional Distribution of Apoptosis in Scoliotic Discs[J].Spine.2005(5)

[5]邓颖.骨痹合剂对大鼠膝骨性关节炎模型IL-1β、TNF-α表达的影响及其颈椎退变的实验研究[D].云南中医学院,2016.