阴道加德纳菌荧光定量PCR试剂盒（探针法）的应用

背景^[1-3]

阴道加德纳菌荧光定量PCR试剂盒（探针法）应用荧光定量PCR的原理检测样品中阴道加德纳菌的定性及定量检测。

自90年代Taqman探针诞生以来，虽然荧光探针（引物）不断有新的技术出现，但是作为一种经典的定量PCR技术，Taqman探针技术仍然是许多实验研究人员进行定量检测的首选，这主要是因为相对于SYBR荧光染料，Taqman探针具有序列特异性，只结合到互补区，而且荧光信号与扩增的拷贝数具有一一对应的关系，因此特异性强灵敏度高，而且条件优化容易

TaqMan荧光探针是一种寡核苷酸探针，其5’末端携带荧光基团，如FAM、TET、VIC、HEX等，3’端携带淬灭基团，如TAMRA、BHQ等。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

加德纳杆菌为革兰氏阴性细小杆菌，常呈球杆状，有时呈丝状和多形状，常见两极染色。宽0.4--0.6微米，长1--2微米大小，无活动力、无鞭毛、无芽孢。许多菌株有荚膜。在人工培养时必须给予新鲜血液才能生长繁殖，故有“嗜血”之称。但其生物特性与嗜血杆菌不尽相同，临床上引起的阴道炎为非特异性阴道炎。

应用^[4][5]

用于阴道加德纳菌几种检测方法对细菌性阴道病诊断价值评价研究

探讨阴道加德纳菌几种实验室检测方法对细菌性阴道病的诊断价值，为细菌性阴道病的诊断提供切实可行的诊断依据；对加德纳菌感染的常用药物进行药敏试验，指导临床用药。

方法应用聚合酶链反应扩增阴道分泌物中的加德纳菌，并与细菌的分离培养，涂片检测和细菌性阴道病快速诊断试验进行平行检测。结果对237份阴道分泌物标本进行了检测，根据细菌性阴道病的金标准即Amsel标准，分为细菌性阴道病组（174例），非细菌性阴道病组（63例），健康对照组（40）例。细菌性阴道病患者4种加德纳菌检测法（培养、PCR、线索细胞和BV试验）阳性检出率均明显高于非细菌性阴道病患者和健康对照组，（x2分别为14.72、33.37、86.89、88.43和16.17、17.64、84.07、132.32，P值均<0.005，差异有显著性）。

细菌性阴道病与非细菌性阴道病患者分泌物涂片的加德纳菌、线索细胞和白细胞的检出率有统计学上的差异（x2分别为65.38、44.91和9.50，P值均小于0.05）。89份培养阳性标本中，对其中23株加德纳菌菌株作了药敏试验，结果对甲硝唑敏感2株，替硝唑敏感3株，罗红霉素敏感3株，阿奇霉素敏感4株，氯林可霉素敏感1株，其余均为耐药。

结论加德纳菌在细菌性阴道病中占有主导作用，是细菌性阴道病的重要致病菌之一。加德纳菌在细菌性阴道病的微生物菌群中约占1/3~1/2，为主要病原菌。细菌性阴道病快速诊断试验快速、敏感，适于细菌性阴道病的筛查；阴道分泌物涂片革兰氏染色找加德纳菌和线索细胞，易于重复、便于保存，而且可以同时进行霉菌、淋球菌等的检测。

参考文献

[1]HIV in the Female Genital Tract:Viral Shedding and Mucosal Immunity[J].LENA AL-HARTHI,ALAN LANDAY.Clinical Obstetrics and Gynecology.2001(2)

[2]Binding of heme by Gardnerella vaginalis[J].Gregory P.Jarosik,Carol BethLand.J.Basic Microbiol..2001(1)

[3]Myeloid-related protein(MRP)-8 from cervico-vaginal secretions activates HIV replication[J].Farhad B.Hashemi,Juergen Mollenhauer,Lawrence D.Madsen,Beverly E.Sha,Wolfgang Nacken,Mary B.Moyer,Clemens Sorg,Gregory T.Spear.AIDS.2001(4)

[4]Identification of a Gardnerella vaginalis Hemoglobin-Binding Protein[J].Gregory P.Jarosik.Current Microbiology.2001(1)

[5]刘俊芬.阴道加德纳菌几种检测方法对细菌性阴道病诊断价值评价[D].山西医科大学,2004.