细胞核蛋白提取试剂盒的应用

背景^[1-3]

细胞核蛋白提取试剂盒提供了一种简单而应用广泛的方法以及相应的试剂提取各种用途的核蛋白，整个过程耗时不超过60分钟.提取的核蛋白可用于：western印迹、蛋白-DNA结合分析实验、核酶分析实验以及各种其它需要活性核蛋白的实验。提取实验简便快捷，可以从哺乳动物细胞和组织样品中获得大量核提取产物.试剂盒尤其为满足各种EpiQuik分析实验需求而设计。

细胞核蛋白提取试剂盒的独特组份（含有特殊的非离子型去污剂以及焦磷酸钠等数种蛋白磷酸酶和蛋白酶抑制试剂），能够在非变性和低渗的条件下裂解细胞，经过洗涤去除大部分胞质蛋白和膜蛋白，释放的细胞核能够保持完整，再用Lysis Buffer对细胞核蛋白质进行抽提的同时可以保持核蛋白的活性。

在研究细胞时经常要研究细胞的不同组份，而研究得最多的两个细胞组份就是细胞核和细胞浆。分离细胞核蛋白和细胞浆蛋白，不仅可以用于研究蛋白在细胞内的定位，而且很多时候分离出来的核蛋白可以用于转录调控方面的研究，例如EMSA(也称gel shift)，footprinting等。

应用^[4][5]

用于肝细胞核蛋白及胞浆蛋白诱导建立的系统性红斑狼疮兔模型研究

为了建立经济、稳定、简便、可重复性强,并能提供足量研究样本的系统性红斑狼疮兔模型,以便于今后进一步进行SLE发病机制和治,疗学的研究。

方法：选取1岁龄体重约2.5kg雌性新西兰白兔50只,随机分为5组,每组10只。提取同种异体肝脏细胞核蛋白及细胞浆蛋白,设首次注射时间为第0天,于第0天及第1、2、4、6、8、10、12周末予实验组兔蛋白提取物500μg/次(浓度为：1 mg/ml),其中,实验组1皮下注射肝细胞核蛋白,实验组2皮下注射肝细胞浆蛋白,实验组3经静脉注射肝细胞浆蛋白；

相同时间点予对照组1皮下注射等体积PBS,予对照组2静脉注射等体积PBS。实验组1、2及对照组1首次注射时将抗原制剂与完全弗氏佐剂等体积乳化。于第1周开始至第18周末,每两周于耳缘静脉采集各组兔血液,并以特制兔体液收集代谢笼收集各组兔24h尿。

观测各组兔血Scr、BUN、TP、ALB、ALT、AST等生化指标及24h尿蛋白含量；用ELISA法测定各组兔血清ANA、抗dsDNA抗体及抗Sm抗体。并于第18周末处死所有实验动物。皮肤组织经HE和免疫组化染色；肾脏组织行HE染色、Masson染色和免疫组化染色,并对肾脏和皮肤病变的严重程度及范围进行半定量分级。

参考文献

[1]New Animal Models for Autoimmune Hepatitis[J].Urs Christen,Edith Hintermann,Elmar Jaeckel.Semin Liver Dis.2009(03)

[2]Lupus-like autoantibody development in rabbits and mice after immunization with EBNA-1 fragments[J].Brian D.Poole,Timothy Gross,Shannon Maier,John B.Harley,Judith A.James.Journal of Autoimmunity.2008(4)

[3]Genetic contributions to the autoantibody profile in a rabbit model of systemic lupus erythematosus(SLE)[J].Nandakumar Puliyath,Satyajit Ray,Jacqueline Milton,Rose G.Mage.Veterinary Immunology and Immunopathology.2008(3)

[4]Expression and localization of rabbit B-cell activating factor(BAFF)and its specific receptor BR3 in cells and tissues of the rabbit immune system[J].Jiahui Yang,Richard Pospisil,Rose G.Mage.Developmental and Comparative Immunology.2008(5)

[5]罗彦彦.肝细胞核蛋白及胞浆蛋白诱导建立的系统性红斑狼疮兔模型[D].广西医科大学,2011.