人肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)ELISA试剂盒于测定人血清、血浆及相关液体样本中肠脂肪酸结合蛋白（iFABP)含量。

实验原理

应用双抗体夹心法测定标本中人肠脂肪酸结合蛋白（iFABP)水平。用纯化的人肠脂肪酸结合蛋白（iFABP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肠脂肪酸结合蛋白（iFABP)，再与HRP标记的肠脂肪酸结合蛋白（iFABP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的肠脂肪酸结合蛋白（iFABP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人肠肪酸结合蛋白（iFABP)浓度。

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于肠脂肪酸结合蛋白对腹部闭合性损伤所致小肠破裂诊断价值的研究

脂肪酸结合蛋白(fatty acid binding protein,FABP)是一种低分子家族式蛋白,肠脂肪酸结合蛋白(intestinal fatty acid binding protein,IFABP)是其中成员之一,主要位于小肠粘膜微绒毛尖端,是一组存在于细胞液内的一种低分子量蛋白,其大量存在于小肠粘膜层上皮细胞中,占肠粘膜蛋白的2-3%,在肠粘膜对长链脂肪酸的摄取、转运及代谢调节中发挥重要作用。

正常情况下,外周静脉血中检测不到IFABP,发生小肠粘膜破裂损伤时,最早发生病理生理改变的是微绒毛尖端,维持绒毛尖端稳定的环境打破及氧分压下降,导致肠绒毛顶端细胞的坏死,肠上皮细胞通透性增加,其内的IFABP经过门静脉和乳糜管释放入血。

肠脂肪酸结合蛋白可能是小肠黏膜损伤的早期血清学标志物。IFABP在正常情况下的外周血中不存在,仅在发生小肠破裂时释放入血,并可被检测,这种变化为其成为小肠破裂的标记物提供了可能性。

研究结果发现IFABP作为诊断肠破裂具有独特优势:(1)IFABP具有较好器官特异性,仅存于肠道中。同时具有特异的抗原决定簇,可通过免疫学方法与其他组织产生的脂肪酸结合蛋白区分;

(2) IFABP是一组存在于细胞液内的一种低分子量蛋白,主要位于小肠黏膜层的肠上皮细胞胞液中,对肠破裂引发的损害敏感,在发生小肠破裂时易释放入血,血清IFABP水平病程早期即明显升高,敏感性好;

(3)IFABP占细胞胞液蛋白质的1%-2%,含量相对丰富,且IFABP分子量相对较小,实验室可采用酶联免疫法直接检测;

参考文献

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[2]A Pilot Study on the Noninvasive Evaluation of Intestinal Damage in Celiac Disease Using I-FABP and L-FABP[J].Joep P.M.Derikx,Anita C.E.Vreugdenhil,Anita M.Van den Neucker,Joep Grootjans,Annemarie A.van Bijnen,Jan G.M.C.Damoiseaux,L.W.Ernest van Heurn,Erik Heineman,Wim A.Buurman.Journal of Clinical Gastroenterology.2009(8)

[3]Systematic Review and Pooled Estimates for the Diagnostic Accuracy of Serological Markers for Intestinal Ischemia[J].Nicholas J.Evennett,Maxim S.Petrov,Anubhav Mittal,John A.Windsor.World Journal of Surgery.2009(7)

[4]Transient postprandial ischemia is associated with increased intestinal fatty acid binding protein in patients with chronic gastrointestinal ischemia[J].Peter B.F.Mensink,Lieke Hol,Nicole Borghuis-Koertshuis,Robert H.Geelkerken,Ard B.Huisman,Cees J.A.Doelman,Adriana J.van Vuuren,Ernst J.Kuipers,Jeroen J.Kolkman.European Journal of Gastroenterology&Hepatology.2009(3)

[5]邢竞晓.肠脂肪酸结合蛋白对腹部闭合性损伤所致小肠破裂诊断价值的研究[D].石河子大学,2016.