鼠抗人C-MYC抗体的应用

背景^[1-3]

鼠抗人C-MYC抗体是一类可以特异性结合人C-MYC的多克隆抗体，主要用于检测人C-MYC的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中人C-MYC水平。用纯化的人C-MYC抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人C-MYC，再与HRP标记的人C-MYC抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人C-MYC呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人C-MYC浓度。

c-myc基因定位于染色体8q24、IgH、IgK、Igλ链的基因位点分别在14q32、2P13和22q11，在BL细胞中往往出现C-myc基因位点与Ig基因位点之间的易位，即C-myc易位到Ig位点的高活性转录区，从而组成一个高转活性的重排基因，启动C-myc转录，使C-myc表达增强，促进细胞恶变，最后导致肿瘤的发生。

一般认为c-myc仅仅是促进细胞增殖的，但也发现它具有双重作用。长期培养的成纤维细胞中加入生长因子，诱导c-myc基因表达，可刺激细胞增殖；当撤去生长因子，且下调c-myc基因表达时，细胞停滞在G1期而不增殖；当撤去生长因子，而上调c-myc时，可见细胞从G1期进入S期，迅速凋亡。即：c-myc和生长因子均阴性时，细胞停滞生长；二者均阳性时，细胞群体增殖；c-myc阳性而生长因子阴性时，细胞进入凋亡。

应用^[4][5]

用于逆转录病毒载体介导的反义人c-myc基因的转移研究

研究c-myc基因的生物学功能并加以调控，一种行之有效的方法就是利用基因工程的手段将该基因反向克隆到表达载体中，导入靶细胞，分析反义产物对myc基因的抑制作用以及导致的生物学效应。

实验简介如下：1．构建了一个含有反义人c-myc基因片段(第三外显子及3′旁侧序列)的逆转录病毒载体p-DAM3。

2．用DNA-磷酸钙沉淀法将pDAM3导入嗜双向性病毒包装细胞PA317，经过G418筛选获得病毒效价为8×10~5CFU／ml的单克隆病毒包装细胞(PA-DAM3-1)，以及其它7个单克隆细胞及1个多克隆细胞(病毒效价略低于PA-DAM3-1)。Southern blot分析证实PA-DAM3细胞中的病毒载体序列稳定地整合到PA317细胞中。克隆的包装细胞传代50次后仍具有G418抗性。

3．利用DAM3病毒成功地感染了体外培养的人食管癌细胞系EC8712，得到G418抗性细胞EC-DAM3，Southern blot分析证实DAM3病毒在EC8712细胞中的完整性。用单链探针标记的RNA杂交结果表明EC8712细胞中存在着大量的反义myc RNA分子。

参考文献

[1]MicroRNA Regulation of Cell Lineages in Mouse and Human Embryonic Stem Cells[J].Kathryn N.Ivey,Alecia Muth,Joshua Arnold,Frank W.King,Ru-Fang Yeh,Jason E.Fish,Edward C.Hsiao,Robert J.Schwartz,Bruce R.Conklin,Harold S.Bernstein,Deepak Srivastava.Cell Stem Cell.2008(3)

[2]Differential Regulation of microRNAs by p53 Revealed by Massively Parallel Sequencing:miR-34a is a p53 Target That Induces Apoptosis and G1-arrest[J].Valery Tarasov,Peter Jung,Berlinda Verdoodt,Dmitri Lodygin,Alexey Epanchintsev,Antje Menssen,Gunter Meister,Heiko Hermeking.Cell Cycle.2007(13)

[3]Unique microRNA molecular profiles in lung cancer diagnosis and prognosis[J].Nozomu Yanaihara,Natasha Caplen,Elise Bowman,Masahiro Seike,Kensuke Kumamoto,Ming Yi,Robert M.Stephens,Aikou Okamoto,Jun Yokota,Tadao Tanaka,George Adrian Calin,Chang-Gong Liu,Carlo M.Croce,Curtis C.Harris.Cancer Cell.2006(3)

[4]MicroRNA expression and function in cancer[J].Ramiro Garzon,Muller Fabbri,Amelia Cimmino,George A.Calin,Carlo M.Croce.Trends in Molecular Medicine.2006(12)

[5]吴凯.Let-7a内源性小分子RNA对人乳腺癌MCF-7细胞生长抑制作用[D].南方医科大学,2010.