Anti-ACTA2 Rabbit Monoclonal Antibody的应用

背景^[1-3]

Anti-ACTA2 Rabbit Monoclonal Antibody是一类可以特异性结合ACTA2的兔单克隆抗体，主要用于检测ACTA2的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中ACTA2水平。用纯化的ACTA2抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入ACTA2，再与HRP标记的ACTA2抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的ACTA2呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中ACTA2浓度。

ACTA2（actin alpha 2）是一种肌动蛋白，有多个别名，包括α-肌动蛋白、α-肌动蛋白-2、主动脉平滑肌或α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)。Actins是球状多功能蛋白质的一个家族，形成微丝。ACTA2是6种不同肌动蛋白亚型之一，参与平滑肌的收缩。

ACTA2（和所有actins一样）极其保守，几乎在所有哺乳动物中都有发现。在人类中，ACTA2由位于10q22-q24的ACTA2基因编码。该基因突变导致多种血管疾病，如胸主动脉疾病、冠状动脉疾病、中风、烟雾病和多系统平滑肌功能障碍综合征。ACTA2（α-SMA）目前被认为是肌成纤维细胞的标志。

应用^[4][5]

用于NRG-1调节α-肌动蛋白表达及平滑肌细胞收缩功能的分子机制研究

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的主要功能是通过收缩来调节血管的张力和直径,进而调节由血压和血液的分布。VSMCs存在增殖型和收缩型两种表型。收缩型VSMCs可以表达多种平滑肌分化标志基因,例如α-肌动蛋白(smooth muscleα-actin,α-SMA)、肌球蛋白重链(SM-myosin heavy chain,MHC)、平滑肌蛋白22-α(smooth muscle protein 22-α,SM22α)。血清反应因子(serum response factor,SRF)通过募集myocardin、MRTF-A/B等辅助因子来调控平滑肌标志基因的的表达。

用CRISPR interference(CRISPRi)封闭技术,即用d Cas9+g RNA阻断RNA聚合酶II与NRG-1-ICD结合位点结合后,观察circ ACTA2表达变化。合成一段与NRG-1-ICD结合位点互补的单链g RNA,它通过介导Cas9酶与α-SMA基因内含子结合而阻断转录的起始及延伸。q RT-PCR结果显示,封闭NRG-1-ICD结合位点后circ ACTA2表达降低,而α-SMA m RNA没有变化。

并且还发现,单独给予TGF-β1刺激或者过表达NRG-1-ICD均可以使circ ACTA2的表达增高,同时给予二者时,会进一步增加circ ACTA2的表达水平。3 circ ACTA2介导TGF-β1对α-SMA表达的诱导作用设计两个si RNA,一个特异性敲低circ ACTA2(si-circ ACTA2),另一个是同时敲低环状和线状ACTA2(si-both)。结果发现,单独敲低circ ACTA2不影响α-SMA m RNA水平;同时敲低环状和线状RNA时,会使circ ACTA2和α-SMA m RNA的水平均下降。

Western blot结果显示,过表达或者敲低circ ACTA2分别增加或降低α-SMA蛋白水平。为了进一步验证circ ACTA2是否介导TGF-β1对α-SMA蛋白表达的影响,过表达circ ACTA2后再给予TGF-β1处理,结果发现,过表达circ ACTA2可以进一步增强TGF-β1对α-SMA表达的上调作用。反之,敲低circ ACTA2则降低TGF-β1对α-SMA表达的诱导。

综上所述,circ ACTA2介导TGF-β1和NRG-1-ICD对α-SMA表达的调节。

参考文献

[1]Effects of neuregulin GGF2(cimaglermin alfa)dose and treatment frequency on left ventricular function in rats following myocardial infarction[J].Tom J.Parry,Anindita Ganguly,Erika L.Troy,J.Luis Guerrero,Jennifer F.Iaci,Maya Srinivas,Andrea M.Vecchione,Donald C.Button,Craig S.Hackett,Ronald Zolty,Douglas B.Sawyer,Anthony O.Caggiano.European Journal of Pharmacology.2017

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[5]孙艳.NRG-1调节α-肌动蛋白表达及平滑肌细胞收缩功能的分子机制[D].河北医科大学,2017.