大鼠外周血单个核细胞的应用

背景^[1-3]

大鼠外周血单个核细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

大鼠外周血单个核细胞分离自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，我们把这样得到的干细胞称为外周血干细胞，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中首次提出外周血这一新概念。外周血单个核细胞（PBMC）即外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。目前，主要的分离方法是密度梯度离心法，因为血液中各有形成分的比重存在差异，因此得以分离出不同的细胞。

外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)是外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。注意这里是mononuclear cell单个核细胞，而不是Monocyte单核细胞。外周血单个核细胞主要的分离方法是Ficoll-hypaque（聚蔗糖－泛影葡胺）密度梯度离心法。

外周血单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞，其比重为1.070左右，而红细胞和多核白细胞的比重超过1.080。这样利用介于两者比重之间的溶液(称为分层液)做密度梯度离心，就可得到单个核细胞。最常用的分层液为聚蔗糖和泛影酸钠混合比重为1.070±0.001的溶液，国内常用泛影葡胺代替泛影酸钠。

应用^[4][5]

用于外周血单个核细胞移植对脑出血大鼠脑水肿的影响研究

在胶原酶诱发的大鼠出血模型中移植外周血单个核细胞,探讨其对脑出血后脑水肿和神经损伤的治疗效果。

探讨外周血单个核细胞移植对脑出血大鼠的影响方法1.通过密度梯度离心法提取大鼠外周血单个核细胞,置于1640完全培养基中培养。

2. 采用立体定位仪定向注射Ⅶ型胶原酶构建大鼠ICH模型,根据m NSS评分筛选模型大鼠。

3. 取30只模型大鼠分为PBS组和实验组,每组10只,另外取15只大鼠分为未处理组。将三组大鼠分别于实验组大鼠细胞移植后第0、1、3、7和14天,每天处死3只大鼠并检测脑组织含水量。

4. 取24只模型大鼠分为PBS组和单个核细胞组,每组12只,另外取12只大鼠分为未处理组。于移植后第1、3、7和14天进行神经功能缺损评分。

取实验组与对照组大鼠于移植后第3天行HE染色观察大脑血肿组织炎症情况;结果1.实验组与对照组相比,大鼠神经功能恢复更好,至3天起实验结束,神经功能评分低于模型组(P<0.05);

2. 与对照组相比,实验组降低大鼠脑出血后脑水肿,出血半球的脑含水量较模型组低(P<0.05)；

3.与对照组相比,实验组大鼠脑血肿周围炎症细胞浸润较轻。结论静脉注射外周血单个核细胞可减轻脑出血大鼠脑水肿和促进损伤神经功能恢复。

参考文献

[1]Concise Review:Prospects of Bone Marrow Mononuclear Cells and Mesenchymal Stem Cells for Treating Status Epilepticus and Chronic Epilepsy[J].Satish Agadi,Ashok K.Shetty.Stem Cells.2015(7)

[2]Effects of bone marrow?derived mesenchymal stem cells transplanted viathe portal vein or tail vein on liver injury in rats with liver cirrhosis[J].Ying?Ming Song,Chang?Hong Lian,Cheng?Song Wu,Ai?Fang Ji,Juan?Juan Xiang,Xiao?Yan Wang.Experimental and Therapeutic Medicine.2015(4)

[3]Mouse bone marrow-derived mesenchymal stem cells inhibit leukemia/lymphomacell proliferation in vitro and in a mouse model of allogeneic bone marrow transplant[J].Ningxia Song,Lei Gao,Huiying Qiu,Chongmei Huang,Hui Cheng,Hong Zhou,Shuqing Lv,Li Chen,Jianmin Wang.International Journal of Molecular Medicine.2015(1)

[4]Bone marrow-derived mesenchymal stem cells attenuate acute liver injuryand regulate the expression of fibrinogen-like-protein 1 and signal transducerand activator of transcription 3[J].Zhuolin Zou,Yijing Cai,Yi Chen,Si Chen,Liyuan Liu,Zhonghai Shen,Sainan Zhang,Lanman Xu,Yongping Chen.Molecular Medicine Reports.2015(2)

[5]孙霄.外周血单个核细胞移植对脑出血大鼠脑水肿的影响[D].郑州大学,2015.