人角膜细胞的应用

背景^[1-3]

人角膜细胞提取于人角膜组织，于原代冻存。细胞通过免疫荧光染色验证，经测试不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

位于眼球壁前端1/6无血管的透明纤维膜称角膜。正常角膜高度透明，表面光滑，前凸后凹，形如凸凹透镜，边缘与巩膜似表壳相接。从后面看是圆形，从正前面看是横圆形，这是因为前面角膜的上下缘受巩膜和结膜的伸展被覆多于水平两侧之故。角膜分为角膜本部和角膜缘部。组织学上由前向后分五层：上皮细胞层、前弹性层、基质层、后弹性层和内皮细胞层。但在裂隙灯活体显微镜下可看到泪膜、上皮、前弹性层、基质、后弹性膜、内皮六层。

角膜细胞也叫角膜成纤维细胞，是高度分化的一类细胞，处于角膜基质中的胶原层中。在维持角膜结构和透明有重要的作用，因为它是胶原基质的营养来源，在角膜修复和组织修复过程发挥作用。在生长因子和细胞因子的影响下，受到损伤后发生表型转变。

在正常情况下，成人角膜基质细胞是相对静止的，然而当角膜受到损伤或创伤时，角膜基质就会分化成具有活性的合成细胞，能迅速的代替受损的基质。

人角膜基质细胞的培养在表面表达功能性IL-4Rs和IL-17R，说明这些细胞参与了IL-4和IL-17介导的角膜过敏反应。用IL-1处理后，角膜细胞的基因表达发生了变化，这让我们对基因表达有了新的认识，也为角膜炎症的治疗提供了新的靶点。

应用^[4][5]

用于双氯芬酸钠对三种人角膜细胞的凋亡诱导作用研究

双氯芬酸钠（Diclofenac Sodium,DFS）是一类重要的眼用非甾体抗炎药，通过抑制环氧化酶和脂氧化酶活性减少前列腺素、白三烯等炎性因子的合成和释放，从而发挥抗炎、镇痛的作用，同时具有保护血眼屏障的功能。近年来，DFS被广泛应用于眼科。

利用实验室自建的非转染人角膜上皮细胞（HCEPC）、人角膜基质细胞（HCSC）和人角膜内皮细胞（HCEC）的细胞系作为体外研究体系，研究了DFS对HCEPC、HCSC和HCEC的毒性作用，为了进一步证明其对在体角膜的影响作用。

为了检测不同浓度DFS对三种人角膜细胞的影响作用，确定可引起细胞凋亡的有效药物浓度及其处理时间，本实验在现有临床使用浓度（1g/L）的基础上，倍比降低药剂浓度至0.03125g/L，通过光镜观察发现1g/L、0.5g/L、0.25g/LDFS在28h内均可引起HCEPC、HCSC和HCEC形态发生变化，细胞皱缩变圆直至脱壁死亡，证明DFS在浓度高于0.25g/L时对三种人角膜细胞均具有显著的细胞毒性。

为了确定不同浓度DFS处理不同时间对三种人角膜细胞的毒性作用，本实验进行了吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）荧光双染色实验，结果发现HCEPC、HCSC和HCEC的凋亡率与DFS的作用浓度和作用时间呈明显的正相关性。

参考文献

[1]Nonsteroidal Anti-inflammatory Drugs in Ophthalmology[J].Stephen J.Kim,Allan J.Flach,Lee M.Jampol.Survey of Ophthalmology.2010(2)

[2]Effect of prophylactic nonsteroidal antiinflammatory drugs on cystoid macular edema assessed using optical coherence tomography quantification of total macular volume after cataract surgery[J].David R.P.Almeida,Davin Johnson,Hussein Hollands,Donald Smallman,Stephanie Baxter,Kenneth T.Eng,Vladimir Kratky,Martin W.ten Hove,Sanjay Sharma,Sherif El-Defrawy.Journal of Cataract&Refractive Surgery.2008(1)

[3]Preoperative topical indomethacin to prevent pseudophakic cystoid macular edema[J].Journal of Cataract&Refractive Surgery.2007(5)

[4]Bromfenac Ophthalmic Solution 0.09%(Xibrom)for Postoperative Ocular Pain and Inflammation[J].Eric D.Donnenfeld,Edward J.Holland,Robert H.Stewart,James A.Gow,Lisa R.Grillone.Ophthalmology.2007(9)

[5]邹平.双氯芬酸钠对三种人角膜细胞的凋亡诱导作用研究[D].中国海洋大学,2012.