鼠小脑细胞英文名:C8-D1A的应用

背景^[1-3]

鼠小脑细胞英文名C8-D1A该细胞以日小鼠小脑为外植体，经体外自发转化，建立了具有星形胶质细胞或小胶质细胞特性的克隆性永久性细胞系。细胞系是在一个多阶段的过程中获得的。开始培养4个月后出现多种形态的缓慢增殖，并逐渐变成外观均匀且丰满的细胞。该细胞具有小神经胶质细胞特征。该细胞为GFAP阳性细胞，除此之外，没有检测到其它神经胶质神经元或小神经胶质细胞的分子标记。

收到冻存细胞的处理方法：

1.37°C水浴预热培养基；

2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）；

3.在超净台中加入5ml培养基重悬细胞，1000rpm离心5min；

4.弃上清，加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中，轻轻晃匀；

5.置于37°C，5%CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话，瓶盖不要拧太紧)；

6.第二天，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。

细胞传代

1.当细胞融合度达到90%以上时，给细胞传代；

2.37°C水浴预热培养基；

3.在超净台中，弃培养基，加入2-5mlPBS清洗细胞后，再加入1ml胰酶消化细胞；

4.显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，加入5ml培养基终止消化；

5.用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散；

6.将细胞移入离心管中，1000rpm离心5min；

7.弃上清，加入15-20ml的培养基重悬细胞后转入T75培养瓶中或按适当比例传到T25瓶中（确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间），细胞密度大于1×10⁴ cells/cm2，混匀细胞悬液，确保均匀分布；

8.将培养瓶置于37°C，5%CO2的无菌培养箱中培养。

应用^[4][5]

用于超短波通过调节MK2/TNF-α通路抑制炎症反应促进脊髓损伤修复研究

超短波（USW）治疗在临床上越来越受到广泛关注。USW作用广泛,可扩张局部血管,改善局部血液循环和组织营养,还可以消炎镇痛,提高神经肌肉兴奋性和生物活性。USW曾被报道对SCI有保护作用。炎性反应是脊髓继发性损伤的一个重要环节,一般持续时间较长,损伤范围较广。

其中最常见的炎性因子是TNF-α及IL-1β,在细胞毒性反应中起非常重要作用。丝裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶2（MK2）及其介导的炎症参与SCI。MK2参与调控细胞周期、细胞迁移、肌动蛋白重构以及炎症反应等。MK2还参与关节炎、高血压、动脉粥样硬化、阿尔茨海默病、急性胰腺炎以及银屑病等疾病的炎症反应过程。

H2O2处理的C8-D1A星形胶质细胞中,MK2、TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白表达与对照组相比显著升高（P<0.01）。3、在体外细胞模型中,H2O2组和H2O2+USW组的MK2、TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白表达表达水平显著升高（P<0.01）。而与H2O2组相比,H2O2+USW组的MK2、TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。与对照组相比,H2O2组和H2O2+USW组的细胞凋亡水平显著升高（P<0.01）。而与H2O2组相比,H2O2+USW组的细胞凋亡水平显著降低（P<0.01）。

参考文献

[1]MicroRNA-335 and its target Rock1 synergistically influence tumor progressionand prognosis in osteosarcoma[J].Yong Wang,Ningning Wang,Xiandong Zeng,Jie Sun,Guangbin Wang,Huimian Xu,Wei Zhao.Oncology Letters.2017(5)

[2]Influence of Relative Strength on Functional Independence of Patients With Spinal Cord Injury[J].Frederico Ribeiro Neto,Patrícia Guanais,Guilherme H.Lopes,Elisa Dornelas,Daniela de Campos Barbetta,Alessandra C.Coutinho,Carlos Wellington Gon?alves,Rodrigo Rodrigues Gomes Costa.Archives of Physical Medicine and Rehabilitation.2016

[3]Comprehensive Proteomic Analysis of Mesenchymal Stem Cell Exosomes Reveals Modulation of Angiogenesis via Nuclear Factor‐KappaB Signaling[J].Johnathon D.Anderson,Henrik J.Johansson,Calvin S.Graham,Mattias Vesterlund,Missy T.Pham,Charles S.Bramlett,Elizabeth N.Montgomery,Matt S.Mellema,Renee L.Bardini,Zelenia Contreras,Madeline Hoon,Gerhard Bauer,Kyle D.Fink,Brian Fury,Kyle J.Hendrix,Frederic Chedin,Samir EL‐Andaloussi,Billie Hwang,Michael S.Mulligan,Janne Lehti?,Jan A.Nolta.STEM CELLS.2016(3)

[4]Inhibition of reactive oxygen species downregulates the MAPK pathway in rat spinal cord after limb ischemia reperfusion injury[J].Eun Kyung Choi,Jin-Seok Yeo,Chan Yoon Park,Ho in Na,Jung a Lim,Jeong-Eun Lee,Seong Wook Hong,Sung-Sik Park,Dong Gun Lim,Kyung Hwa Kwak.International Journal of Surgery.2015

[5]王楠.超短波通过调节MK2/TNF-α通路抑制炎症反应促进脊髓损伤修复[D].中国医科大学,2019.