ECV304细胞的应用

背景^[1-3]

ECV304细胞本身为人脐静脉膀胱细胞，可用于脐静脉静脉损伤修复的研究，但是经检测证明，ECV-304细胞已经被膀胱污染；ECV-304细胞具有T24细胞特性。

ECV304细胞培养操作

复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为类；

1.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

用于金丝桃苷对ECV-304细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

研究了金丝桃苷体外抗氧化损伤作用及其分子机制，着重阐述了在人脐静脉血管内皮细胞ECV-304氧化损伤过程中，金丝桃苷对线粒体的保护作用及其机制。

研究结果表明，ECV-304细胞在强氧化剂叔丁基过氧化氢(tert-butylhydroproxide，TBHP)的作用下，发生氧化损伤，最终导致细胞凋亡。金丝桃苷能够明显抑制TBHP诱导ECV-304细胞凋亡，且其抗氧化作用强于N-乙酰半胱氨酸(NAC)。

金丝桃苷能够显著降低TBHP损伤的ECV-304细胞中MDA含量并提高SOD的活力。金丝桃苷对氧化应激诱导的细胞损伤的保护作用与其影响线粒体的功能密切相关，主要表现在：它通过改善和恢复线粒体膜电位，提高了线粒体氧化还原能力。同时，这一作用抑制了线粒体内促凋亡因子细胞色素c(cytochrome c)的释放，进而阻断了促凋亡信号的转导。

研究还发现，金丝桃苷可通过调控线粒体相关的Bcl-2家族蛋白的表达，发挥其对TBHP诱导的细胞损伤的保护作用。

总之，金丝桃苷能够清除细胞内过多的自由基，调节线粒体的功能及线粒体相关的Bcl-2家族蛋白的定位和表达，从而发挥其抗氧化作用。综上所述，金丝桃苷能够有效地保护氧化应激诱导的细胞损伤，并改善线粒体功能。

参考文献

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[5]高健美.金丝桃苷对ECV-304细胞氧化损伤的保护作用及机制研究[D].沈阳药科大学,2007.